穿心莲八氢番茄红素脱氢酶ApPDS的基因克隆及功能鉴定(3)
3结果
3.1穿心莲PDS基因核心片段的克隆及序列分析用八氢番茄红素脱氢酶基因的保守序列设计的简并引物PDSF和PDSR，以穿心莲幼苗的总RNA反转录成的第一条链cDNA为模板，扩增得到1段736 bp的核心片段(图1，A)。用NCBI中的BLAST对该序列进行分析，与多种植物中的PDS基因序列高度同源，与同目的芝麻PDS同源性高达87%，认为是穿心莲PDS基因的保守序列。
3.2穿心莲PDS基因3′端和5′端的克隆结果及分析利用穿心莲PDS基因保守序列设计的嵌套氏特异性GSP引物，经Touchdown PCR进行3′RACE和5′RACE扩增。1%琼脂糖凝胶电泳检测产物，分别得到长度为1 015 bp的3′端(图1，B)和849 bp的5′端(图1，C)，其中和保守序列重叠的片段长度为178，198 bp，在NCBI上BLAST后，确定为穿心莲PDS基因的3′端和5′端序列。
3.3穿心莲PDS基因全长cDNA的拼接及其编码区的克隆与分析将扩增的3段基因序列进行拼接，得到穿心莲PDS基因的全长cDNA序列2 224 bp，预测该基因具有一个1 752 bp的完整开放阅读框 ......
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3.1穿心莲PDS基因核心片段的克隆及序列分析用八氢番茄红素脱氢酶基因的保守序列设计的简并引物PDSF和PDSR，以穿心莲幼苗的总RNA反转录成的第一条链cDNA为模板，扩增得到1段736 bp的核心片段(图1，A)。用NCBI中的BLAST对该序列进行分析，与多种植物中的PDS基因序列高度同源，与同目的芝麻PDS同源性高达87%，认为是穿心莲PDS基因的保守序列。
3.2穿心莲PDS基因3′端和5′端的克隆结果及分析利用穿心莲PDS基因保守序列设计的嵌套氏特异性GSP引物，经Touchdown PCR进行3′RACE和5′RACE扩增。1%琼脂糖凝胶电泳检测产物，分别得到长度为1 015 bp的3′端(图1，B)和849 bp的5′端(图1，C)，其中和保守序列重叠的片段长度为178，198 bp，在NCBI上BLAST后，确定为穿心莲PDS基因的3′端和5′端序列。
3.3穿心莲PDS基因全长cDNA的拼接及其编码区的克隆与分析将扩增的3段基因序列进行拼接，得到穿心莲PDS基因的全长cDNA序列2 224 bp，预测该基因具有一个1 752 bp的完整开放阅读框 ......
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