补阳还五汤及其精简方(脑健片)对脑缺血大鼠海马组织CDK4/CyclinD1表达的影响(2)
2.3免疫组化法检测CDK4/CyclinD1的表达各组大鼠分别于给药后1，3，7，14，28d随机挑出5只，采用心脏灌注法固定大脑，约灌注200mL多聚甲醛后断头取脑，去嗅球、小脑和低位脑干，置于预冷的4%多聚甲醛中固定24h，脱水后将脑组织用石蜡包埋，4℃保存备用。将海马组织切成5mm的切片于防脱玻片上。将烘干后的切片逐步脱蜡和水化后进行抗原修复，并用羊血清于37℃温箱中封闭30min。取出切片加一抗(CDK4，CyclinD1)，空白对照组加PBS，置于湿盒内，于4℃冰箱中孵育过夜，再加入二抗37℃温箱孵育30min。显色复染后脱水，封片，晾干，于显微镜下观察。
2.4RTPCR法检测CDK4/CyclinD1mRNA的表达各组大鼠分别于给药后1，3，7，14，28d随机挑出5只，用10%水合氯醛将大鼠麻醉，断头取脑，迅速分离出海马，置冻存管中于-80℃保存备用。将海马组织匀浆后采用试剂盒提取组织RNA，逆转录合成cDNA，按反应程序37℃60min；85℃5min；4℃5min用特定引物进行各目的基因的反转录 ......
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2.4RTPCR法检测CDK4/CyclinD1mRNA的表达各组大鼠分别于给药后1，3，7，14，28d随机挑出5只，用10%水合氯醛将大鼠麻醉，断头取脑，迅速分离出海马，置冻存管中于-80℃保存备用。将海马组织匀浆后采用试剂盒提取组织RNA，逆转录合成cDNA，按反应程序37℃60min；85℃5min；4℃5min用特定引物进行各目的基因的反转录 ......
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