菘蓝莽草酸羟基肉桂酸酰转移酶IiHCT基因的克隆和表达分析(3)

http://www.100md.com 2015年11月1日 《中国中药杂志》2015年第21期

     2.6 IiHCT基因的表达分析 超净台准确0.5 g菘蓝毛状根，接种到50 mL 1/2MS+3%蔗糖液体培养基，经过28 ℃黑暗条件下摇床培养12 d后，茉莉酸甲酯(MeJA)处理悬浮细胞，使其终浓度为100 μmol·L^-1，利用Plant RNA Reagent，按照操作说明书，分别提取提取各个时间点(0，4，8，12，24 h)的总RNA，采用PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser先去除DNA，将总RNA反转录成cDNA，通过荧光定量PCR检测HCT基因的表达情况。利用Beacon Designer 8.0设计IiHCT实时荧光定量PCR引物(HCTRT-F：5′- CCTACTAATGATGGAAGC-3′，HCTRT-R：5′-TGAATCTGCGACAATAAG-3′)，选取菘蓝β-actin作为内参基因，引物为IiActin-F：5′-CCAGTGGTCGTACAACCGGTA-3′和IiActin-R：5′-TAGTTCTTTTCGATGGAGGAGCTG-3′ ......