黄芩葡萄糖醛酸水解酶基因的克隆、生物信息学分析及表达(2)
2方法
2.1总RNA提取和cDNA的合成从-80℃超低温冰箱中取保存好的黄芩叶片于液氮中速冻，研钵研成细粉状，按EASYspinPlusPlantRNAKit使用说明，提取黄芩叶片中总RNA。利用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。利用M-Mulv第一链cDNA试剂盒以Oliga-dT为引物，合成黄芩叶片cDNA链。
反应体系(12μL)为总RNA模板10μL，RNaseFreeH2O1μL，5g·L-1Oliga1μL。反应条件为65℃水浴5min后，立即放于冰上冷却30s，然后离心3～5s。5倍Reaction缓冲液4μL，20U·μL-1RnaseInhibitor1μL，10mmol·L-1dNTPMix2μL，20U·μL-1M-MuLvRT1μL ......
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2.1总RNA提取和cDNA的合成从-80℃超低温冰箱中取保存好的黄芩叶片于液氮中速冻，研钵研成细粉状，按EASYspinPlusPlantRNAKit使用说明，提取黄芩叶片中总RNA。利用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。利用M-Mulv第一链cDNA试剂盒以Oliga-dT为引物，合成黄芩叶片cDNA链。
反应体系(12μL)为总RNA模板10μL，RNaseFreeH2O1μL，5g·L-1Oliga1μL。反应条件为65℃水浴5min后，立即放于冰上冷却30s，然后离心3～5s。5倍Reaction缓冲液4μL，20U·μL-1RnaseInhibitor1μL，10mmol·L-1dNTPMix2μL，20U·μL-1M-MuLvRT1μL ......
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