雷公藤MCT基因的全长克隆与表达分析(1)

http://www.100md.com 2015年11月15日 《中国中药杂志》2015年第22期

     [摘要]根据雷公藤转录组数据提供的基因片段设计特异引物，采用全长PCR方法克隆TwMCT全长cDNA，分析序列同源性，预测TwMCT蛋白结构，并进行序列多重比对和构建系统进化树分析；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)，以actin为内参，分析雷公藤悬浮细胞受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后0～72hTwMCT基因的相对表达量。克隆得到全长1318bpTwMCT全长cDNA，具有完整编码框，编码311个氨基酸，蛋白相对分子质量为34.14kDa，理论等电点为8.65；RT-qPCR结果表明该基因受MeJA诱导后表达逐渐上升，在24h时达到最高值。克隆雷公藤TwMCT全长cDNA和分析表达特性，为进一步研究该基因的功能和雷公藤次生代谢调控提供了基因元件。

    [关键词]雷公藤；2-C-甲基-D-赤藻醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)；克隆；表达分析

    中药雷公藤是卫矛科雷公藤属植物雷公藤TripterygiumwilfordiiHook.F.的干燥根或根的木质部，味苦，性寒，有大毒；具有祛风湿，活血通络，消肿止痛，杀虫的功效[1]。雷公藤主要有效成分为倍半萜类生物碱 ......