2.2.4 全长cDNA序列分析 将测序的cDNA序列用DNAMAN 软件翻译成氨基酸序列，用DNAMAN和NCBI(National Center for Biotechnology Information， http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/) 网站上的Blast N和Blast P进行核苷酸序列和氨基酸序列的比对，使用ORF Finder查找开放阅读框(ORF)。

    2.3 基因表达分析

    采用实时荧光定量PCR法测定当归幼苗不同生长阶段4CL基因的组织特异性表达。以测序全长cDNA设计并合成4CL特异性引物P8和P9，以当归18S片段序列(Genbank登录号GU289658)设计并合成一对内参特异性引物P10，P11。以大约200 ng当归cDNA为模板，建立荧光定量PCR反应体系。反应程序参照文献方法进行^[16]，退火温度调整为58 ℃。用2^-ΔΔCt法计算基因相对表达量 ......