陈皮“陈久者良”之黄酮类成分增加原因探究(2)
2 方法与结果2.1 陈皮霉变样品的制备
取各批次样品约100.0 g,放入无菌培养盒内,并置于人工气候箱中(T=30 ℃,RH=95%)。培养一定时间后(约5 d),将霉变后的陈皮样品进行分装。
2.2 陈皮表面侵染真菌的分离与纯化[10]
取各批次未霉变样品各5.0 g,置于无菌的50 mL离心管中,加入30 mL 0.1%聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween-20),剧烈振荡3 min,再用塞有无菌棉花的一次性注射器过滤,收集滤液,5 000 r·min-1离心10 min,弃上清,沉淀加入300 μL 无菌40%甘油重悬,再依次稀释成浓度为1×10-4的菌液,分别取100 μL涂布于PDA板上(含氯霉素0.1 g·L-1),30 ℃恒温培养3 d。观察培养基上生长出菌落后,用接种环转移到新的PDA(含氯霉素0.1 g·L-1)平板上继续培养、转接 ......
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