菟丝子、莱菔子与其易混淆品的快速PCR法鉴别研究(1)

http://www.100md.com 2016年1月15日 《中国中药杂志》2016年第2期

     [摘要]完善快速PCR鉴定检测体系，并建立菟丝子或莱菔子的分子鉴别方法。收集不同地区的菟丝子、莱菔子及其易混淆品材料，所有样品进行总DNA的提取，通过对菟丝子、莱菔子及其易混淆样品ITS片段进行扩增、测序，进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物，采用2步法进行PCR扩增，从而对菟丝子或莱菔子进行鉴别。通过对影响PCR退火温度、变性温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行优化，并对不同型号PCR仪进行考察，分别获得菟丝子、莱菔子快速PCR反应程序。在稀释后的PCR产物中加入SYBR Green I染料，正品显示出明亮绿色荧光，而混淆品不显示荧光，且可有效的避免因引物二聚体而存在的假阳性问题。快速PCR方法可以简单快速鉴别菟丝子、莱菔子，为实现药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑。

    [关键词]快速PCR；菟丝子；莱菔子；分子鉴定；荧光检测

    据2010年版《中国药典》一部记载，菟丝子来源为旋花科植物南方菟丝子cuscuta australis R.Br.或菟丝子C.chiinensis Lm的干燥成熟种子。莱菔子来源为十字花科植物萝卜Raphanus sativus L.的干燥成熟种子 ......