五味子酯甲抑制肝窦内皮细胞功能及血管新生的活性评价(2)
2.6 荧光探针法 胞内NO水平的检测：药物孵育24h后，弃培养液，每孔加入原位装载5μmol·L-1DAF-FMDA(NO探针)100μL孵育20min后，PBS洗涤3次。Thermo scientific varioskan flash光谱扫描多功能读数仪上检测，激发波长495nm，发射波长515nm。NOS活性检测：药物孵育24h后，弃培养液，每孔加入NOS检测缓冲液、检测反应液各100μL，孵育2h后PBS洗涤3次。Thermo scientificvarioskan flash光谱扫描多功能读数仪上检测，激发波长495nm，发射波长515nm。
2.7 细胞迁移试验 Transwell小室的下室以1mg·L-1纤维粘连蛋白37℃细胞培养箱内包被过夜。细胞同步化后，胰酶消化，离心，用0.4%胎牛血清调整细胞密度至2×105个/mL，上室加入细胞和药物培养液各150μL，药物组各设3个复孔，下室加5%胎牛血清细胞培养液600μL孵育8h后弃上下两室培养液，4%多聚甲醛固定细胞，PBS洗涤，结晶紫染色10min，PBS洗涤。Olympus倒置显微镜下观察细胞迁移情况，拍摄。
2.8 细胞管腔形成试验 每孔加100μL Matri-ge1聚合1h，细胞胰酶消化后调整细胞浓度至5×104个/mL与药物培养液按1：1混合，每孔200μL铺在matrigel上 ......
您现在查看是摘要页，全文长 5664 字符。
2.7 细胞迁移试验 Transwell小室的下室以1mg·L-1纤维粘连蛋白37℃细胞培养箱内包被过夜。细胞同步化后，胰酶消化，离心，用0.4%胎牛血清调整细胞密度至2×105个/mL，上室加入细胞和药物培养液各150μL，药物组各设3个复孔，下室加5%胎牛血清细胞培养液600μL孵育8h后弃上下两室培养液，4%多聚甲醛固定细胞，PBS洗涤，结晶紫染色10min，PBS洗涤。Olympus倒置显微镜下观察细胞迁移情况，拍摄。
2.8 细胞管腔形成试验 每孔加100μL Matri-ge1聚合1h，细胞胰酶消化后调整细胞浓度至5×104个/mL与药物培养液按1：1混合，每孔200μL铺在matrigel上 ......
您现在查看是摘要页，全文长 5664 字符。