6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究(2)
2.3 鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1体外活性
2.3.1 UGTs活性测定 参照Bock K W等报道的方法，以4-NP为底物，紫外分光光度法检测其含量，UGTs活性按底物消耗量/(反应时间×蛋白量)计算，即单位时间内1mg蛋白消耗底物的量。200μL的温孵体系包含：大、小鼠肝微粒体(蛋白质量终浓度为0.2g·L-1)、丙甲菌素(50mg·g-1pro-tein)、3mmol·L-1UDPGA、100mmol·L-1Tris缓冲液(pH7.4)、5mmol·L-1氯化镁、5mmol·L-1D-糖酸-1，4-内酯、1mmol·L-14-NP以及100μmol·L-1的各生物碱。37℃预孵育5min，加入UDP-GA启动反应，继续孵育30min，加入2mL5%三氯乙酸终止反应，离心(13000×g，10min)，取1mL上清液 ......
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2.3.1 UGTs活性测定 参照Bock K W等报道的方法，以4-NP为底物，紫外分光光度法检测其含量，UGTs活性按底物消耗量/(反应时间×蛋白量)计算，即单位时间内1mg蛋白消耗底物的量。200μL的温孵体系包含：大、小鼠肝微粒体(蛋白质量终浓度为0.2g·L-1)、丙甲菌素(50mg·g-1pro-tein)、3mmol·L-1UDPGA、100mmol·L-1Tris缓冲液(pH7.4)、5mmol·L-1氯化镁、5mmol·L-1D-糖酸-1，4-内酯、1mmol·L-14-NP以及100μmol·L-1的各生物碱。37℃预孵育5min，加入UDP-GA启动反应，继续孵育30min，加入2mL5%三氯乙酸终止反应，离心(13000×g，10min)，取1mL上清液 ......
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