药用植物羌活种子DNA条形码鉴定研究(2)
2.2DNA提取轻取1粒种子实验(约3 mg，避免带出它粒种子碎屑)，用DNA提取研磨仪(Retsch MM400，Germany) 研磨2 min (30次/s)，使用植物DNA提取试剂盒 (天根生化科技(北京)有限公司) 提取总DNA，加入消化液后，56 ℃水浴过夜。采用NanoDrop 2000(Thermo Scientific， USA) 测定DNA浓度，并根据A260/A280，A260/A230判断DNA提取质量。
2.3PCR扩增及测序PCR反应体积为25 μL，反应体系的配置、扩增引物的选择及反应条件的设置依照Chen等[7]的研究方法操作，PCR产物经纯化后使用ABI3730XL测序仪进行双向测序。
2.4数据处理测序峰图利用CodonCode Aligner V4.2.7(CodonCode Co.， USA)去除低质量区域、校对拼接和引物序列切除。基于隐马尔可夫模型 (Hidden Markov model) 去除5.8S rRNA和28S rRNA区段获得ITS2序列[8] ......
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2.3PCR扩增及测序PCR反应体积为25 μL，反应体系的配置、扩增引物的选择及反应条件的设置依照Chen等[7]的研究方法操作，PCR产物经纯化后使用ABI3730XL测序仪进行双向测序。
2.4数据处理测序峰图利用CodonCode Aligner V4.2.7(CodonCode Co.， USA)去除低质量区域、校对拼接和引物序列切除。基于隐马尔可夫模型 (Hidden Markov model) 去除5.8S rRNA和28S rRNA区段获得ITS2序列[8] ......
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