桔梗同源四倍体诱导及其基因组DNA甲基化差异分析(3)
选择性扩增完成后在扩增PCR产物中加入上样缓冲液，94 ℃变性10 min 后然后立即转移到冰上冷却防止复性，取5 μL变性产物于6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行垂直电泳分析，银染后观察。
2.5条带统计与数据处理
由于甲基敏感扩增多态性技术中分别用EcoRⅠ/HpaⅡ和EcoRⅠ/MspⅠ双切酶对基因组DNA进行酶切。因此每个样品同时拥有2条泳道：第1条泳带采用EcoRⅠ/HpaⅡ进行酶切，记为H，第2条泳带采用EcoRⅠ/ MspⅠ进行酶切，记为M。同一位点有条带的记为“1”，无带的记为“0”。
3结果与分析
3.1增殖及生根培养基优化
将长1.5～2 cm的桔梗不定芽接到7种增殖培养基中，经30 d培养后均出现不定芽增殖的现象，具体结果见表4，在4号培养基中，分化的芽数最多，增殖系数平均达9.3±0.24，且出芽整齐，生长健壮，叶色浓绿。因此，桔梗无菌苗增殖的最适培养基为MS+6-BA 1.5 mg·L-1+ NAA 0.3 mg·L-1。
生根培养基优化结果见表5 ......
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2.5条带统计与数据处理
由于甲基敏感扩增多态性技术中分别用EcoRⅠ/HpaⅡ和EcoRⅠ/MspⅠ双切酶对基因组DNA进行酶切。因此每个样品同时拥有2条泳道：第1条泳带采用EcoRⅠ/HpaⅡ进行酶切，记为H，第2条泳带采用EcoRⅠ/ MspⅠ进行酶切，记为M。同一位点有条带的记为“1”，无带的记为“0”。
3结果与分析
3.1增殖及生根培养基优化
将长1.5～2 cm的桔梗不定芽接到7种增殖培养基中，经30 d培养后均出现不定芽增殖的现象，具体结果见表4，在4号培养基中，分化的芽数最多，增殖系数平均达9.3±0.24，且出芽整齐，生长健壮，叶色浓绿。因此，桔梗无菌苗增殖的最适培养基为MS+6-BA 1.5 mg·L-1+ NAA 0.3 mg·L-1。
生根培养基优化结果见表5 ......
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