黄花蒿促分裂原活化蛋白激酶基因及其在重金属镉胁迫下表达分析(2)
23AaMAPK家族基因的获取以拟南芥的MAPKs为query序列,1×10-6作为E Value的临界值,进行本地BLAST,所得序列进行保守域和Pfam分析,以获取黄花蒿的MAPKs基因。
24引物设计从Unigene中调出AaMAPKs基因序列,根据Realtime PCR引物设计需满足的条件通过Primer Premier 50软件设计特异性引物,并交由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。
25总RNA的提取与实时荧光定量分析从-80 ℃冰箱取出试验材料,在EP管中加入磁珠,用球磨粉碎机粉碎。总RNA的提取参照QIAGEN公司的RNeasy Plant Mini Kit (cat nos 74903 and 74904)和RNaseFree DNase Set(cat no79254)说明操作。使用Takara公司的反转录试剂盒(PrimerScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis Kit)进行反转录 ......
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24引物设计从Unigene中调出AaMAPKs基因序列,根据Realtime PCR引物设计需满足的条件通过Primer Premier 50软件设计特异性引物,并交由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。
25总RNA的提取与实时荧光定量分析从-80 ℃冰箱取出试验材料,在EP管中加入磁珠,用球磨粉碎机粉碎。总RNA的提取参照QIAGEN公司的RNeasy Plant Mini Kit (cat nos 74903 and 74904)和RNaseFree DNase Set(cat no79254)说明操作。使用Takara公司的反转录试剂盒(PrimerScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis Kit)进行反转录 ......
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