丹参雄性不育与可育近等基因系差异片段的发掘(3)

http://www.100md.com 2016年4月15日 《中国中药杂志》2016年第8期

     33丹参雄性不育与可育系染色体步移片段的获得以E11/M04208片段为模板，运用染色体步移技术分别扩增获得上游1 000 bp，下游1 800 bp的片段，并通过菌落PCR和质粒PCR验证。测序后将上下游扩增序列进行拼接，设计特异性引物在可育基因池与不育基因池中再次进行全序列扩增。除去PMD19T通用引物序列后在可育系中得到2 027 bp的序列，不育系中得到2 028 bp的序列(图4)。经DNAMAN序列比对，发现分别不育系在第662(C→T)，690(C→T)，1 072(G→A)，1 800(T→C)位碱基发生突变，且均发生在内含子区域。

    34差异片段的比对分析运用BLAST程序对所有AFLP差异片段和不育系中染色体步移获得的2 028 bp片段进行比对分析，发现只有E01/M09418，E05/M13308，E05/M04750和E01/M01204标记与拟南芥1，3，5号染色体相似性均为100%，E在046～88(表5)。

    将所有AFLP差异片段与拟南芥中已发现的一个仅有的核不育基因MS2(位于拟南芥第3号染色体 ......