越南人参皂苷R7抑制LPS及TNFα联合诱导大鼠星形胶质细胞C6的激活作用研究(3)
23炎症基因表达分析于60 mm2培养皿中接种细胞，按21项下处理方法，进行药物处理，收取细胞样品，TRIzol法提取总RNA，去除DNA污染后，使用反转录cDNA试剂盒处理，反转录为cDNA，按照Taqman SYBR kit试剂盒说明方法进行实时定量PCR。PCR使用引物序列见表1。
24IL6和TNFα检测于60 mm2培养皿中接种细胞，按21项下方法，对其进行药物处理后，取100 μL细胞培养基，分别按照ELISA试剂盒使用说明，测定其中IL6及TNFα的含量。
25NFκB转录活性检测采用双荧光素酶报告基因检测法，取对数生长C6细胞，按15×106个/mL浓度接入24孔板过夜培养，至细胞生长90%，吸出24孔板中上清液，使用PBS清洗，每孔加入500 μL OptiMEM；按要求配制混合NFκB质粒(05 μg/孔)，每管加75 μL OptiMEM，同时配制lipofectamine 2000，二者混合，静置5 min后按比例加入板中 ......
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24IL6和TNFα检测于60 mm2培养皿中接种细胞，按21项下方法，对其进行药物处理后，取100 μL细胞培养基，分别按照ELISA试剂盒使用说明，测定其中IL6及TNFα的含量。
25NFκB转录活性检测采用双荧光素酶报告基因检测法，取对数生长C6细胞，按15×106个/mL浓度接入24孔板过夜培养，至细胞生长90%，吸出24孔板中上清液，使用PBS清洗，每孔加入500 μL OptiMEM；按要求配制混合NFκB质粒(05 μg/孔)，每管加75 μL OptiMEM，同时配制lipofectamine 2000，二者混合，静置5 min后按比例加入板中 ......
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