一种药物注射剂类过敏反应高内涵检测方法的初步建立(2)

http://www.100md.com 2016年5月15日 《中国中药杂志》2016年第10期

     高内涵筛选(high content screen， HCS)系统是基于荧光显微成像技术进行图像定量分析的自动化平台，能够在细胞结构和功能完整条件下检测药物对细胞多种功能活动的影响，本研究基于高内涵平台建立类过敏反应检测方法；细胞脱颗粒是类过敏反应的核心环节，包括囊泡转运、定向、锚定、融合和回收等步骤[11]，本研究采用RBL2H3细胞脱颗粒模型，应用膜特异荧光染料FM464标记细胞脱颗粒囊泡回收，在HCS系统检测药物注射剂所导致细胞内荧光强度增加来反映细胞脱颗粒状况，通过细胞核荧光染料Hochest 33342标记细胞核进行细胞计数，计算细胞脱颗粒率来预测类过敏反应发生，从而建立一种预测注射剂类过敏发生的HCS检测方法。

    1材料与方法

    11试剂与仪器

    大鼠嗜碱粒性白血病细胞(RBL2H3)(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，Cat No TCR 7)；MEM酚红(Lot No1645771)/无酚红 (Lot No 1663883)培养基，胎牛血清(Lot No1205330)(Gibco公司)；荧光染料FM 464(Lot No 1614994 ......