川牛膝CoObgC基因克隆、亚细胞定位及表达分析(1)

http://www.100md.com 2016年7月15日 《中国中药杂志》2016年第14期

     [摘要]根据川牛膝基因组数据提供的基因序列合成特异性引物，利用常规PCR方法和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆川牛膝ObgC(GeneBank登录号KU84.7910)全长cDNA序列，克隆获得2 2.2.6 bp全长CoObgC序列，开放阅读框为1 81.8 bp，编码605个氨基酸序列，预测CoObgC蛋白相对分子质量为663.9 kDa，等电点pI 5.3.5，为稳定蛋白，并进行多重序列比对和构建系统进化树分析。以川牛膝actin为内参，采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)分析CoObgC基因在川牛膝根、茎、叶、花4种组织中表达特征，结果显示在叶片中表达丰度最高，其次为根、花、茎；构建pCABIA2.300CoObgC重组载体，利用农杆菌介导法在烟草中进行瞬时表达，激光扫描共聚焦显微镜观察显示川牛膝CoObgC定位于叶绿体。该研究为进一步解析Obg基因的结构和功能，开展川牛膝分子生物学研究奠定基础。

    [关键词]川牛膝； ObgC； 基因克隆； 亚细胞定位； 表达分析

    川牛膝Cyathula officinalis Kuan是苋科杯苋属植物药材 ......