淫羊藿总黄酮对大鼠心肌急性缺血再灌注损伤氧化应激干预机制的研究(2)
2.3.3血清肌钙蛋白I(troponin I，TnI)的测定心肌再灌注末，经大鼠腹主动脉抽取全血3 mL，常温3000 r·min-1离心15min，取上清，采用ELISA法测定血清TnI水平，具体操作按试剂盒说明书进行。
2.3.4心肌组织病理学观察实验结束后，于心脏结扎线下近心端取心肌组织，10%甲醛固定，石蜡包埋后切片，苏木素.伊红(HE)染色，光镜下观察病理变化。
2.3.5心肌缺血远端组织SIRTl蛋白表达检测心肌再灌注结束后，于心脏结扎线下远心端1/3处取心肌组织，10%甲醛固定，石蜡包埋后切片、脱蜡。采用H2O2去除内源性过氧化物，将切片放入0.01mol·L-1枸橼酸缓冲液中进行微波修复。5%牛血清白蛋白(BSA)封闭20 min，加入抗SIRT1小鼠单克隆抗体(1：500)37℃孵育30 min。PBS充分漂洗后，依次滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG进行结合反应，DAB显色后苏木素复染，盐酸分化，脱水封片，进行镜下观察。利用IPP6.0图像分析系统进行图像分析，随机选择5个视野对阳性细胞进行平均灰度值测定。
2.3.6心肌缺血远端组织Nrf2蛋白表达检测心肌再灌注结束后，于心脏结扎线下远心端1/3处取心肌组织进行匀浆，采用BCA法测定总蛋白浓度后进行SDS-PAGE电泳，蛋白质以12%凝胶分离后转移到PVDF膜上，5%脱脂牛奶封闭2 h，大鼠Nrf2单克隆一抗(1：1000)4℃孵育过夜 ......
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2.3.4心肌组织病理学观察实验结束后，于心脏结扎线下近心端取心肌组织，10%甲醛固定，石蜡包埋后切片，苏木素.伊红(HE)染色，光镜下观察病理变化。
2.3.5心肌缺血远端组织SIRTl蛋白表达检测心肌再灌注结束后，于心脏结扎线下远心端1/3处取心肌组织，10%甲醛固定，石蜡包埋后切片、脱蜡。采用H2O2去除内源性过氧化物，将切片放入0.01mol·L-1枸橼酸缓冲液中进行微波修复。5%牛血清白蛋白(BSA)封闭20 min，加入抗SIRT1小鼠单克隆抗体(1：500)37℃孵育30 min。PBS充分漂洗后，依次滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG进行结合反应，DAB显色后苏木素复染，盐酸分化，脱水封片，进行镜下观察。利用IPP6.0图像分析系统进行图像分析，随机选择5个视野对阳性细胞进行平均灰度值测定。
2.3.6心肌缺血远端组织Nrf2蛋白表达检测心肌再灌注结束后，于心脏结扎线下远心端1/3处取心肌组织进行匀浆，采用BCA法测定总蛋白浓度后进行SDS-PAGE电泳，蛋白质以12%凝胶分离后转移到PVDF膜上，5%脱脂牛奶封闭2 h，大鼠Nrf2单克隆一抗(1：1000)4℃孵育过夜 ......
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