梅花鹿鹿茸Ⅰ型胶原对大鼠成骨样细胞(ROS1728)的影响及其分子机制的研究(2)
2.3 SPC-I对ROS1728细胞相关基因的影响
取对数生长期的ROS1728细胞，消化、重悬、计数，以2.5x104个/mL接种于6孔培养板，每孔2mL，每组3个复孔，实验分组同上，24h后更换条件培养液。分别在条件培养后48，72h后，RT-PCR检测Runx2，osterix，ALP，OC，Coll-I，G3PDH基因的表达，基因序列见表1。采用Trizol试剂提取细胞内总RNA，检测其完整性。以总RNA为模板，Oligo为引物，逆转录酶AMV 42℃进行逆转录反应，以所得的cDNA为模板进行PCR反应。PCR产物在2%琼脂糖凝胶中电泳结束后，以全自动数字凝胶成像仪保存图像并用Quantiyt One软件扫描分析，将所扩增特定产物的光密度与管家基因产物的光密度的比值作为评价基因表达水平的指标。登录GenBank
(http：//www.ncbi.nih.gov/Entrez/ne-cleotide)，检索目的基因的cDNA全长核苷酸序列 ......
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取对数生长期的ROS1728细胞，消化、重悬、计数，以2.5x104个/mL接种于6孔培养板，每孔2mL，每组3个复孔，实验分组同上，24h后更换条件培养液。分别在条件培养后48，72h后，RT-PCR检测Runx2，osterix，ALP，OC，Coll-I，G3PDH基因的表达，基因序列见表1。采用Trizol试剂提取细胞内总RNA，检测其完整性。以总RNA为模板，Oligo为引物，逆转录酶AMV 42℃进行逆转录反应，以所得的cDNA为模板进行PCR反应。PCR产物在2%琼脂糖凝胶中电泳结束后，以全自动数字凝胶成像仪保存图像并用Quantiyt One软件扫描分析，将所扩增特定产物的光密度与管家基因产物的光密度的比值作为评价基因表达水平的指标。登录GenBank
(http：//www.ncbi.nih.gov/Entrez/ne-cleotide)，检索目的基因的cDNA全长核苷酸序列 ......
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