花叶型与艾叶型乌头叶片基因组DNA甲基化修饰的MSAP分析(2)
1.4 引物序列 本次实验所用引物和接头由北京华大基因公司合成，具体名称及核苷酸序列见表1。
2 方法
2.1 乌头叶片基因组DNA的提取 本实验中乌头叶片总DNA提取使用天根公司的植物基因组提取试剂盒(离心柱型，CAT DP305)，并按照试剂盒说明书步骤逐步完成基因组DNA 提取。
2.2 EcoRⅠ/ HpaⅡ及EcoRⅠ/MspⅠ双酶切 EcoRⅠ及HpaⅡ/MspⅠ接头引物等体积混合，配置成终浓度为50 μmol·L-1的混合液，混合液于94 ℃变性10 min 后进行自然降温以进行2条引物的复性配对，使单链复性成双链DNA，再进行双酶切，设置酶切时间分别为4，8，12，16，24 h以确定最佳的双酶切时间。酶切反应总体系20 μL：EcoRⅠenzyme(10 U·μL-1)0.5 μL，HpaⅡenzyme(10 U·μL-1)
0.1 μL或MspⅠenzyme(10 U·μL-1)0.3 μL ......
您现在查看是摘要页，全文长 3887 字符。
2 方法
2.1 乌头叶片基因组DNA的提取 本实验中乌头叶片总DNA提取使用天根公司的植物基因组提取试剂盒(离心柱型，CAT DP305)，并按照试剂盒说明书步骤逐步完成基因组DNA 提取。
2.2 EcoRⅠ/ HpaⅡ及EcoRⅠ/MspⅠ双酶切 EcoRⅠ及HpaⅡ/MspⅠ接头引物等体积混合，配置成终浓度为50 μmol·L-1的混合液，混合液于94 ℃变性10 min 后进行自然降温以进行2条引物的复性配对，使单链复性成双链DNA，再进行双酶切，设置酶切时间分别为4，8，12，16，24 h以确定最佳的双酶切时间。酶切反应总体系20 μL：EcoRⅠenzyme(10 U·μL-1)0.5 μL，HpaⅡenzyme(10 U·μL-1)
0.1 μL或MspⅠenzyme(10 U·μL-1)0.3 μL ......
您现在查看是摘要页，全文长 3887 字符。