PPARs激动剂体外筛选模型的建立及其在泽泻活性成分筛选中的应用(4)

http://www.100md.com 2016年11月1日 《中国中药杂志》2016年第21期

     同时，本研究PPARs激活作用的检测采用双荧光检测法，pBIND质粒是一种包含了酵母Gal4的DNA结合区(Gal4-DBD)和糖皮质受体配体结合区(GR-LBD)的载体，当其被配体激活时，可诱导包含有Gal4上游激活序列的基因转录表达。本研究正是利用此机制，在GR-LBD区构建一种带有PPARα/β/γ-LBD的嵌合性质粒，这种质粒是由酵母的反作用子Gal4-DBD(DNA结合区)和PPARα/β/γ-LBD(配体结合区)组成，选择的报告基因则是含有Gal4的特异性相应原件的并带有萤火虫酶素基因(Firefly)的质粒，pGL4.35为pBIND的配套报告基因。当PPARα/β/γ-LBD被測试药物激活后，就能诱导报告基因pGL4.35表达并产生荧光酶素，通过测定荧光酶素表达含量的高低，来确定测试药物对PPARs的激活能力。其中renilla荧光素酶和PPARs-LBD在同一个载体上表达，renilla荧光素酶的表达作为内对照反映目标基因PPARs-LBD的表达 ......