鸦胆子蛋白质组成分析及其酶解物细胞毒性研究(3)

http://www.100md.com 2016年11月15日 《中国中药杂志》2016年第22期

     2.2.1 最优蛋白酶的筛选 球蛋白提取液经透析(MWCO：35 kDa)纯化后，进行冷冻干燥。将冻干蛋白粉分别用木瓜蛋白酶、α糜蛋白酶、风味蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶进行水解，底物浓度0.5%，酶与底物浓度比1∶10。选择各种酶的最适宜反应条件：木瓜蛋白酶(50 mmol·L-1 TrisHCl缓冲液，pH 8.0，65 ℃)，α糜蛋白酶(50 mmol·L-1 TrisHCl缓冲液，pH 8.0，37 ℃)，风味蛋白酶(50 mmol·L-1 TrisHCl缓冲液，pH 7.0，65 ℃)，嗜热菌蛋白酶(50 mmol·L-1 TrisHCl缓冲液，pH 8.0，65 ℃)，胃蛋白酶(0.01 mol·L-1 HCl，pH 2.0，37 ℃)和胰蛋白酶(50 mmol·L-1 TrisHCl缓冲液，pH 8.0，37 ℃)。水解液振荡水浴48 h后，95 ℃变性5 min终止反应，冰浴10 min，1万 r·min-1，4 ℃离心20 min，取上清液，超滤离心(MWCO：3 kDa) ......