猪苓菌核2种热激蛋白基因的克隆及其表达分析(2)
2 方法
2.1 总RNA提取及检测 应用EASYspin Plus 植物RNA快速提取试剂盒(艾德莱，中国)并按照操作说明提取各样品RNA，用分光光度计测定总RNA的A260，A280，根据A260/A280≈2.0 判断 RNA 的质量，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 的完整性。以Oligo d(T)18为反转录引物，用 M-MLV 反转录酶试剂盒(Promega，USA)合成cDNA 第一链，放于-20 ℃保存备用。
2.2 基因克隆 在本课题组测得的猪苓转录组文库中检索到2个热休克蛋白基因的全长unigene序列，利用引物设计软件Primer5分别从起始密码子与终止密码子开始设计2对引物(表1)，用RT-PCR方法从猪苓菌核中克隆这2个基因的全长开放读码框 ......
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2.1 总RNA提取及检测 应用EASYspin Plus 植物RNA快速提取试剂盒(艾德莱，中国)并按照操作说明提取各样品RNA，用分光光度计测定总RNA的A260，A280，根据A260/A280≈2.0 判断 RNA 的质量，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 的完整性。以Oligo d(T)18为反转录引物，用 M-MLV 反转录酶试剂盒(Promega，USA)合成cDNA 第一链，放于-20 ℃保存备用。
2.2 基因克隆 在本课题组测得的猪苓转录组文库中检索到2个热休克蛋白基因的全长unigene序列，利用引物设计软件Primer5分别从起始密码子与终止密码子开始设计2对引物(表1)，用RT-PCR方法从猪苓菌核中克隆这2个基因的全长开放读码框 ......
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