13SNP位点开发基于RADSeq技术获得的SNP位点，设计引物筛选与三七抗病性关联的SNP位点。在人工病圃中分别采集60株三七抗病株及感根腐病植株，采用植物基因组提取试剂盒(天根，中国)提取三七叶片总DNA，DNA浓度及质量经检验后，于-20 ℃备用。随机挑选SNP位点进行开发，以record_519688位点设计抗病及对照群体的通用引物，引物序列为F1：5′TCATTATTATTATCCTC3′，R1：5′GAGCTTAACTAGCCCAG3′。针对上述SNP位点设计抗病群体的特异引物，为提高SNP分析的特异性，在特异引物的3′端区域加入1个人工错配碱基，序列信息为Fk1：5′CATTATTATTATCCTCTTC3′，其中反向引物为R1。采用Pyrobest DNA Polymerase(货号 DR005A，日本TaKaRa公司)对供试DNA进行PCR扩增，反应体系参照王瑞等[18]报道。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测后，产物送美吉公司进行测序。将产物的序列信息与RADSeq获得的序列进行比对，确定与抗病相关联的SNP位点。

    14种苗等级分析将抗病群体的种子收集并播种后 ......