血塞通注射液对体外OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应的影响(2)
24Western blot检测蛋白质水平将BV2细胞以10×106个/mL/孔的密度接种于6孔板中,按照OGD 4 h/R 6 h执行体外氧糖剥夺试验,复氧同时给药,复氧结束后收集各组细胞,加入蛋白裂解液提取总蛋白,应用BCA法测定样品蛋白浓度。经SDSPAGE电泳后,电转蛋白至PVDF膜,封闭,分别加入1∶1 000稀释的兔抗小鼠的p38,Phosphop38 MAPK (Thr180/Tyr182),SAPK/JNK(56G8),PhosphoSAPK/JNK (Thr183/Tyr185),p44/42 MAPK (Erk1/2),Phosphop44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204)一抗,4 ℃孵育过夜,TBST洗涤3次,加入HRP标记的羊抗兔二抗(1∶2 000)溶液室温孵育2 h后洗涤膜,ECL法显影,应用ChemiDoc XRS系统拍照,采用GelPro analyzer 4图像分析软件进行显影条带灰度值分析。25免疫荧光检测NFκB p65核转位为检测BV2细胞NFκB p65在细胞中的定位,采用免疫荧光双标法检测OGD/R引起的NFκB p65核转位及药物的抑制作用 ......
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