麝香保心丸中5种人参皂苷类化合物在心肌梗死大鼠血浆中的药代动力学研究(1)
[摘要]麝香保心丸(SBP)是治疗冠心病的经典复方，其中人参皂苷类化合物是其发挥药效的主要成分之一。该文采用液相色谱串联质谱(LCMS/MS)的方法，研究心梗大鼠多次灌胃麝香保心丸、人参提取物(GE)及5种人参皂苷类单体化合物后人参皂苷类化合物的药代动力学特性。研究发现人参皂苷类化合物总体吸收较差，各组Cmax均小于200 μg·L-1。比较各组分析物的Tmax发现人参提取物组和麝香保心丸组中人参皂苷类化合物均比各单一化合物组吸收快，提示人参提取物及复方中均存在促进人参皂苷成分吸收的成分。麝香保心丸组中的各人参皂苷成分的给药剂量在所有给药组中最小，但相应的AUC0t和AUCINF数值最大，表明配伍后麝香保心丸中人参皂苷类成分吸收最好，说明复方是中医药用的最佳形式。
[关键词]麝香保心丸； 人参提取物； 人参皂苷类； 心肌梗死； 药代动力学
麝香保心丸(SBP)源于南宋《太平惠民和剂局方》中收载的苏合香丸，由麝香、蟾酥、人参提取物、苏合香、牛黄、肉桂、冰片组成，具有芳香温通、益气强心之功效。近40年来，麝香保心丸广泛应用于临床治疗冠心病、心绞痛及心肌梗死等疾病[12]，疗效显著。现代药理研究表明麝香保心丸具有舒张血管[3]、稳定易损斑块[4]、缩小心肌梗死面积[5]、抑制血管钙化[6]和促进血管新生[7]等作用。为了阐释麝香保心丸组方的科学内涵，自上市以来对其进行药效物质基础及作用机制方面的研究从未间断。本课題组前期采用现代分离分析手段结合血清药化的方法对麝香保心丸的药效物质基础进行了全面研究[89]，进一步采用药理学及代谢组学方法对其作用机制进行了研究[1013]。
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近年来，中药药代动力学研究在阐释中药复方药效物质基础及作用机制方面的应用越来越广泛。中药药代动力学是利用动力学原理与处理方法，定量地描述中药有效成分、有效部位、单味中药和复方中药通过各种途径进入机体后吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律，在阐明中药作用机制及其科学内涵、设计及优选给药方案、促进新药研发和剂型改进等方面起着重大作用[14]。目前，课题组已对麝香保心丸中的主要药效成分人参皂苷类[1516]、蟾蜍甾体二烯类[17]以及挥发性成分(异龙脑、龙脑、麝香酮和肉桂醛)[18]在正常大鼠体内的药代动力学进行了研究。众所周知，药物最终用于病人治疗疾病，因此研究疾病状态下的中药药代动力学更有意义，且与临床更相关[19]。有文献报道，大鼠心肌梗死后胃肠功能[20]、内分泌水平[21]及血浆纤维蛋白含量[22]均会发生改变，这些由心功能受损引起血流动力学的变化和病理变化都可导致药物血浆药动学和组织分布的改变，影响药物的体内过程。因此本文对麝香保心丸中人参皂苷类成分在心肌梗死模型大鼠体内的药代动力学特征进行了研究。
本文在前期血清药化及药代动力学研究的基础上选取5种人参皂苷类化合物(Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1)作为目标分析物，比较分析心肌梗死大鼠分别多次灌胃5种人参皂苷类单体化合物、人参提取物(GE)和麝香保心丸后5种人参皂苷类化合物的药代动力学特性差异，探讨麝香保心丸中人参皂苷类成分在病理状态下的体内代谢过程，为阐释麝香保心丸的作用机制提供依据。
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1材料
11仪器及试剂安捷伦1200系列高效液相色谱系统(Agilent Technologies，USA)；G6410B三重四级杆质谱检测器，ESI离子源(Agilent Technologies，USA)；MassHunter软件采集和处理数据(B0301版本，Agilent Technologies，USA)。人参皂苷Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1及地高辛(内标，IS)对照品均购自上海鼎瑞化工有限公司(中国上海)，纯度>98%。待测化合物及内标的结构，见图1。人参提取物(批号150412)和麝香保心丸制剂(批号150603)由上海和黄药业(中国上海)提供。乙腈为质谱纯，购自Merck公司(Germany)；甲醇和甲酸分别购自百灵威科技有限公司(中国北京)；SigmaAldrich公司(USA)，均为色谱级；其他试剂均为分析纯。实验中所用的超纯水是由Milli Q50 SP纯水系统制备。
解于10 mL量瓶，超声提取30 min，14 000 r·min-1离心10 min，取上清液。022 μm微孔滤膜过滤，得供试液。分别配制麝香保心丸和人参提取物样品3份，采用LCMS/MS系统进行分析，进样体积为10 μL。根据标准曲线分析，并取平均浓度。最后测得Rg1，Re，Rb3，Rb1，Rc在麝香保心丸中质量分数分别为247，251，423，671，268 mg·g-1；在人参提取物中质量分数分别为1001，1074，1719，2648，1218 mg·g-1。
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24血浆样品制备采用液液萃取法，取100 μL血浆样品置于15 mL离心管中，加入1 mL正丁醇(含内标地高辛25 μg·L-1)。将此混合物涡旋10 min，14 000 r·min-1，4 ℃离心10 min，上清液转移至干净离心管中，45 ℃ N2流下挥干，50 μL甲醇复溶，涡旋10 min，14 000 r·min-14 ℃下离心10 min，取上清液，即得样品溶液。10 μL样品溶液进LCMS/MS系统分析。
25给药及采血实验前所有心梗大鼠禁食12 h，可自由饮水。给药后4 h即可饮水。分别称取麝香保心丸细粉，人参皂苷提取物细粉，Rg1，Re，Rb3，Rb1和Rc，用05%羧甲基纤维素钠(CMCNa)水溶液配制成混悬液。42只心梗大鼠随机分组后，分别灌胃7种药物，包括麝香保心丸组(180 mg kg-1·d-1，n=6)，人参皂苷提取物组(80 mg·kg-1·d-1，n=6)，Rg1组、Re组、Rb3组、Rc组、Rb1组给药剂量与样本数均相同(40 mg·kg-1·d-1，n=6)。所有大鼠称重，连续灌胃5 d。第5天灌胃后，分别在5，15，30，45 min，1，15，2，4，6，8，10，24 h眼眶静脉取血，每次采血量约250 μL，采集的样品收集在预先涂有肝素钠的15 mL 离心管中。所有样本立即在4 ℃，3 500 r·min-1下离心10 min，取上清液，血浆样品保存在-20 ℃冰箱中待分析。, http://www.100md.com(刘群 吴然 吕超 张卫东 柳润辉)
[关键词]麝香保心丸； 人参提取物； 人参皂苷类； 心肌梗死； 药代动力学
麝香保心丸(SBP)源于南宋《太平惠民和剂局方》中收载的苏合香丸，由麝香、蟾酥、人参提取物、苏合香、牛黄、肉桂、冰片组成，具有芳香温通、益气强心之功效。近40年来，麝香保心丸广泛应用于临床治疗冠心病、心绞痛及心肌梗死等疾病[12]，疗效显著。现代药理研究表明麝香保心丸具有舒张血管[3]、稳定易损斑块[4]、缩小心肌梗死面积[5]、抑制血管钙化[6]和促进血管新生[7]等作用。为了阐释麝香保心丸组方的科学内涵，自上市以来对其进行药效物质基础及作用机制方面的研究从未间断。本课題组前期采用现代分离分析手段结合血清药化的方法对麝香保心丸的药效物质基础进行了全面研究[89]，进一步采用药理学及代谢组学方法对其作用机制进行了研究[1013]。
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近年来，中药药代动力学研究在阐释中药复方药效物质基础及作用机制方面的应用越来越广泛。中药药代动力学是利用动力学原理与处理方法，定量地描述中药有效成分、有效部位、单味中药和复方中药通过各种途径进入机体后吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律，在阐明中药作用机制及其科学内涵、设计及优选给药方案、促进新药研发和剂型改进等方面起着重大作用[14]。目前，课题组已对麝香保心丸中的主要药效成分人参皂苷类[1516]、蟾蜍甾体二烯类[17]以及挥发性成分(异龙脑、龙脑、麝香酮和肉桂醛)[18]在正常大鼠体内的药代动力学进行了研究。众所周知，药物最终用于病人治疗疾病，因此研究疾病状态下的中药药代动力学更有意义，且与临床更相关[19]。有文献报道，大鼠心肌梗死后胃肠功能[20]、内分泌水平[21]及血浆纤维蛋白含量[22]均会发生改变，这些由心功能受损引起血流动力学的变化和病理变化都可导致药物血浆药动学和组织分布的改变，影响药物的体内过程。因此本文对麝香保心丸中人参皂苷类成分在心肌梗死模型大鼠体内的药代动力学特征进行了研究。
本文在前期血清药化及药代动力学研究的基础上选取5种人参皂苷类化合物(Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1)作为目标分析物，比较分析心肌梗死大鼠分别多次灌胃5种人参皂苷类单体化合物、人参提取物(GE)和麝香保心丸后5种人参皂苷类化合物的药代动力学特性差异，探讨麝香保心丸中人参皂苷类成分在病理状态下的体内代谢过程，为阐释麝香保心丸的作用机制提供依据。
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11仪器及试剂安捷伦1200系列高效液相色谱系统(Agilent Technologies，USA)；G6410B三重四级杆质谱检测器，ESI离子源(Agilent Technologies，USA)；MassHunter软件采集和处理数据(B0301版本，Agilent Technologies，USA)。人参皂苷Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1及地高辛(内标，IS)对照品均购自上海鼎瑞化工有限公司(中国上海)，纯度>98%。待测化合物及内标的结构，见图1。人参提取物(批号150412)和麝香保心丸制剂(批号150603)由上海和黄药业(中国上海)提供。乙腈为质谱纯，购自Merck公司(Germany)；甲醇和甲酸分别购自百灵威科技有限公司(中国北京)；SigmaAldrich公司(USA)，均为色谱级；其他试剂均为分析纯。实验中所用的超纯水是由Milli Q50 SP纯水系统制备。
解于10 mL量瓶，超声提取30 min，14 000 r·min-1离心10 min，取上清液。022 μm微孔滤膜过滤，得供试液。分别配制麝香保心丸和人参提取物样品3份，采用LCMS/MS系统进行分析，进样体积为10 μL。根据标准曲线分析，并取平均浓度。最后测得Rg1，Re，Rb3，Rb1，Rc在麝香保心丸中质量分数分别为247，251，423，671，268 mg·g-1；在人参提取物中质量分数分别为1001，1074，1719，2648，1218 mg·g-1。
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24血浆样品制备采用液液萃取法，取100 μL血浆样品置于15 mL离心管中，加入1 mL正丁醇(含内标地高辛25 μg·L-1)。将此混合物涡旋10 min，14 000 r·min-1，4 ℃离心10 min，上清液转移至干净离心管中，45 ℃ N2流下挥干，50 μL甲醇复溶，涡旋10 min，14 000 r·min-14 ℃下离心10 min，取上清液，即得样品溶液。10 μL样品溶液进LCMS/MS系统分析。
25给药及采血实验前所有心梗大鼠禁食12 h，可自由饮水。给药后4 h即可饮水。分别称取麝香保心丸细粉，人参皂苷提取物细粉，Rg1，Re，Rb3，Rb1和Rc，用05%羧甲基纤维素钠(CMCNa)水溶液配制成混悬液。42只心梗大鼠随机分组后，分别灌胃7种药物，包括麝香保心丸组(180 mg kg-1·d-1，n=6)，人参皂苷提取物组(80 mg·kg-1·d-1，n=6)，Rg1组、Re组、Rb3组、Rc组、Rb1组给药剂量与样本数均相同(40 mg·kg-1·d-1，n=6)。所有大鼠称重，连续灌胃5 d。第5天灌胃后，分别在5，15，30，45 min，1，15，2，4，6，8，10，24 h眼眶静脉取血，每次采血量约250 μL，采集的样品收集在预先涂有肝素钠的15 mL 离心管中。所有样本立即在4 ℃，3 500 r·min-1下离心10 min，取上清液，血浆样品保存在-20 ℃冰箱中待分析。, http://www.100md.com(刘群 吴然 吕超 张卫东 柳润辉)