白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性甲基化基因表达的影响(3)
26热痹模型大鼠滑膜甲基化水平检测及热痹特征性甲基化基因筛选根据NG,AA及RB 3组大鼠血清因子检测结果,根据IL1β,TNFα,EGF,VEGF,IL17及IL12p70的结果,做聚类分析,剔出3组中各自离散度大的动物,各筛选出3只大鼠进行后续试验。造模后第44天,处死NG,AA及RB 3组中挑选出的大鼠,取膝关节滑膜。按照QIAquick Gel Extraction Kit说明书中组织样本DNA提取方法,提取各大鼠滑膜DNA,并将DNA样本立刻送华大基因进行MeDIPSeq测序。将NG相对RB启动子区甲基化基因和 NG相对AA启动子区甲基化基因以取差集的方式,找出热痹模型特征性甲基化基因。
27白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠滑膜特征性甲基化基因表达的影响
造模后第45天,剥离大鼠后肢膝关节滑膜,并提取总RNA,逆转录为cDNA,作为模版进行PCR。扩增引物为:βactin上游引物为5′CTGGAGAAGAGCTATGAG3′ ......
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