茵陈提取物中化学成分的UHPLC—LTQ—Orbitrap快速鉴定(1)
[摘要]应用UHPLC-HR-MSn技术分析检测茵陈提取物中的化学成分。采用ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)色谱柱和0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)流动相系统进行梯度洗脱；应用LTQ-Orbitrap质谱负离子模式检测茵陈提取物中的化学成分。根据精确分子量数据和多级质谱碎片离子，结合对照品比对和文献报道，共从茵陈提取物中分析鉴定了50个化学成分，包括21个黄酮、22个有机酸、6个香豆素和1个其他类成分。应用UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨液质联用技术较为全面地阐明了茵陈提取物中的化学成分，为进一步研究茵陈提取物的全面质量控制方法、体内代谢过程以及药效物质基础提供了科学依据。
[关键词]茵陈提取物； 液质联用技术； 化学成分鉴定
[Abstract]A rapid and sensitive UHPLC-HR-MSN method was developed for the identification of chemical constituents in capillary wormwood extract. ACQUITY UHPLC HSS T3 chromatography column (2.1 mm×100 mm， 1.7 μm) was used with 0.1% formic acid-acetonitrile solution as the mobile phase in gradient elution. The extract was detected by ESI-LTQ-Orbitrap equipped with an ESI ion source in a negative mode. Based on the accurate mass measurements， retention time， mass fragmentation patterns and literature reports， a total of 50 compounds including 21 flavonoids， 22 phenolic acids， 6 coumarins and 1 other compound were tentatively screened and characterized. These results are helpful for the comprehensive quality control， better comprehension of the metabolism and further study of pharmacodynamic substance from capillary wormwood extract.
, http://www.100md.com
[Key words]capillary wormwood extract； UHPLC-LTQ-Orbitrap MS； chemical constituent identification
茵陳为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst.et Kit.或茵陈蒿A. capillaries Thunb.的干燥地上部分。我国大部分地区均有分布，主产于安徽、浙江、江苏、陕西等省。春季和秋季采收茵陈的分别习称“绵茵陈”和“花茵陈”[1]。茵陈味苦、辛，性微寒，归脾、胃、肝胆经，具有清热利湿、利胆退黄之功效，是一种具有保肝功效的特色中药，常与其他中药配伍用于治疗甲、乙型和黄疸型肝炎。现代研究表明，茵陈中的主要化学成分包括黄酮、有机酸、香豆素、色原酮以及挥发油等。茵陈提取物则是绵茵陈经提取制成的，其质量标准被收载于《中国药典》2015年版一部[2]。目前，现行标准中仅对绿原酸等成分进行质量控制，其他成分尚不明确。这无疑不利于茵陈提取物的全面质量控制和药效物质基础研究。因此，亟需建立一种快速、简便的分析方法来全面阐明茵陈提取物中的化学成分。
, 百拇医药
LC-MS技术具有灵敏度高、选择性强且碎片离子重现性好等诸多优点，已广泛用于中药化学成分的结构鉴定[3-5]。其中，线性离子阱与Orbitrap傅里叶扫描质谱组成的串联质谱仪(LTQ-Orbitrap hybrid mass spectrometry)将线性离子阱的多级质谱功能和Orbitrap高分辨能力质谱结合起来，可同时实现多级质谱碎裂和母离子的高分辨数据采集，为小分子药物及大分子蛋白质的鉴定提供更准确信息[6-8]。本文基于UHPLC-LTQ-Orbitrap建立茵陈提取物中化学成分的分析方法，并结合精确分子质量数据、碎片离子和对照品比对等手段进行结构鉴定，以期为阐明其物质基础进而建立全面的质量控制方法提供科学依据。
1 材料
Ultimate 3000超高效液相色谱仪与LTQ-Orbitrap XL 质谱，配有电喷雾离子源(ESI)，Xcalibur 2.1 工作站(美国Thermo Scientific公司)；Millipore Synergy UV 型超纯水机(美国Millipore 公司)；KQ-250DE 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；R200D 型电子分析天平(1/10万，德国Sartorius 公司)。
菌除法药材产地为广东梅州，经暨南大学药学院张英副教授鉴定为菊科植物茵陈蒿A.capillaris的干燥地上部分。
5-咖啡酰奎宁酸(批号110753-200413)购自中国食品药品检定研究院；3-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、1，5-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸等对照品购自成都曼思特生物科技有限公司。所有对照品纯度均大于98%。乙腈和甲醇(质谱级，德国Merck公司)，甲酸(色谱级，德国Merck公司)，其他均为分析纯。, http://www.100md.com(欧阳文竹 尚展鹏 王文建 王守旭 沈家序 钱浩 马志国 张加余)
[关键词]茵陈提取物； 液质联用技术； 化学成分鉴定
[Abstract]A rapid and sensitive UHPLC-HR-MSN method was developed for the identification of chemical constituents in capillary wormwood extract. ACQUITY UHPLC HSS T3 chromatography column (2.1 mm×100 mm， 1.7 μm) was used with 0.1% formic acid-acetonitrile solution as the mobile phase in gradient elution. The extract was detected by ESI-LTQ-Orbitrap equipped with an ESI ion source in a negative mode. Based on the accurate mass measurements， retention time， mass fragmentation patterns and literature reports， a total of 50 compounds including 21 flavonoids， 22 phenolic acids， 6 coumarins and 1 other compound were tentatively screened and characterized. These results are helpful for the comprehensive quality control， better comprehension of the metabolism and further study of pharmacodynamic substance from capillary wormwood extract.
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[Key words]capillary wormwood extract； UHPLC-LTQ-Orbitrap MS； chemical constituent identification
茵陳为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst.et Kit.或茵陈蒿A. capillaries Thunb.的干燥地上部分。我国大部分地区均有分布，主产于安徽、浙江、江苏、陕西等省。春季和秋季采收茵陈的分别习称“绵茵陈”和“花茵陈”[1]。茵陈味苦、辛，性微寒，归脾、胃、肝胆经，具有清热利湿、利胆退黄之功效，是一种具有保肝功效的特色中药，常与其他中药配伍用于治疗甲、乙型和黄疸型肝炎。现代研究表明，茵陈中的主要化学成分包括黄酮、有机酸、香豆素、色原酮以及挥发油等。茵陈提取物则是绵茵陈经提取制成的，其质量标准被收载于《中国药典》2015年版一部[2]。目前，现行标准中仅对绿原酸等成分进行质量控制，其他成分尚不明确。这无疑不利于茵陈提取物的全面质量控制和药效物质基础研究。因此，亟需建立一种快速、简便的分析方法来全面阐明茵陈提取物中的化学成分。
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LC-MS技术具有灵敏度高、选择性强且碎片离子重现性好等诸多优点，已广泛用于中药化学成分的结构鉴定[3-5]。其中，线性离子阱与Orbitrap傅里叶扫描质谱组成的串联质谱仪(LTQ-Orbitrap hybrid mass spectrometry)将线性离子阱的多级质谱功能和Orbitrap高分辨能力质谱结合起来，可同时实现多级质谱碎裂和母离子的高分辨数据采集，为小分子药物及大分子蛋白质的鉴定提供更准确信息[6-8]。本文基于UHPLC-LTQ-Orbitrap建立茵陈提取物中化学成分的分析方法，并结合精确分子质量数据、碎片离子和对照品比对等手段进行结构鉴定，以期为阐明其物质基础进而建立全面的质量控制方法提供科学依据。
1 材料
Ultimate 3000超高效液相色谱仪与LTQ-Orbitrap XL 质谱，配有电喷雾离子源(ESI)，Xcalibur 2.1 工作站(美国Thermo Scientific公司)；Millipore Synergy UV 型超纯水机(美国Millipore 公司)；KQ-250DE 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；R200D 型电子分析天平(1/10万，德国Sartorius 公司)。
菌除法药材产地为广东梅州，经暨南大学药学院张英副教授鉴定为菊科植物茵陈蒿A.capillaris的干燥地上部分。
5-咖啡酰奎宁酸(批号110753-200413)购自中国食品药品检定研究院；3-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、1，5-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸等对照品购自成都曼思特生物科技有限公司。所有对照品纯度均大于98%。乙腈和甲醇(质谱级，德国Merck公司)，甲酸(色谱级，德国Merck公司)，其他均为分析纯。, http://www.100md.com(欧阳文竹 尚展鹏 王文建 王守旭 沈家序 钱浩 马志国 张加余)