临床用量的复方黄黛片及大剂量雄黄对大鼠肝脏主要药物代谢酶的影响(1)
[摘要]探究临床用量的复方黄黛片及大剂量君药雄黄对大鼠肝脏主要药物代谢酶(CYP450)酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。以Wistar大鼠为研究对象，受试药物给予14 d后，采用Cocktail体外孵育法结合HPLC-MS/MS技术对大鼠肝中CYP1A2，CYP2B，CYP3A，CYP2C各亚酶的活性进行测定，并利用实时荧光定量PCR技术对上述亚型的mRNA水平表达进行检测。结果显示，复方黄黛片显著诱导CYP1A2，CYP2B酶活性，抑制CYP3A酶活性，结果与mRNA的表达具有一致性，但其单味药却呈现出弱于其甚至是相反的现象；不同剂量的雄黄组之间对酶活性及mRNA的表达结果亦呈现非常显著的不一致性。这些现象可能与复方黄黛片的配伍增效或减毒有关。CYP450酶的研究结果亦可以提示，复方黄黛片与其他药物合用时有可能产生药物相互作用。
[关键词]复方黄黛片； 雄黄； 细胞色素P450； 肝微粒体； 酶活性
[Abstract]To investigate the effect of clinical dose of Realgar-Indigo Naturais formula (RIF) and large-dose of Realgar on main drug-metabolizing enzymes CYP450s of rat liver， as well as its regulatory effect on mRNA expression. Wistar rats were administrated orally with tested drugs for 14 days. A Cocktail method combined with HPLC-MS/MS was used in the determination of 4 cytochrome P450 isozymes (CYP1A2， CYP2B， CYP3A and CYP2C) in liver of the rats， and the mRNA expression levels of the above subtypes were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. The results showed that RIF can significantly induce CYP1A2 and CYP2B enzyme activity， and inhibit CYP3A enzyme activity. This result was consistent with the mRNA expression. However， its single compound showed weaker or even contrary phenomenon. Different doses of Realgar also showed significant inconsistencies on CYP450 enzymes activity and mRNA expression. These phenomena may be relevant with RIF compatibility synergies or toxicity reduction. The results can also prompt drug interactions when RIF is combined with other medicines in application.
, http://www.100md.com
[Key words]Realgar-Indigo Naturalis formula； realgar； cytochrome P450； liver microsome； enzyme activity
细胞色素P450(cytochrome P450， CYP450)氧化酶系统是参与机体绝大多数药物、外源性物质和内源性物质进行Ⅰ相氧化代谢的主要酶类[1-2]，临床使用的药物有90%以上由其代谢[3]。因此，该酶在药物代谢以及药物相互作用的研究中有着重要地位。近年来，由于中药应用推广呈现良好态势，而药源性损害事件也屡有报道[4]，因此，基于P450酶系统的中药与其活性成分以及组分配伍的安全性和疗效研究具有十分重要的意义 [5-7]。对确有疗效的有毒中药的相关研究更为重要。
含砷制剂(雄黄、砒霜)在临床治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia， APL)时表现出较好的疗效[8-9]，复方黄黛片(RIF)就是含砷制剂的主要代表药物。其由国医大师黄世林发明，由雄黄、青黛、丹参和太子参组成，临床主治为清热解毒，益气生血，用于初治的APL，疗效显著。复方黄黛片中君药雄黄作为确有疗效的有毒中药，尤为受到关注。目前对复方黄黛片的研究大多聚焦于临床及药理作用的分子机制，因此，本实验针对CYP450酶系统，通过观察给药后大鼠体重、血液指标、CYP各亚酶酶活性水平及mRNA转录水平等的变化，初步探究临床用量的复方黄黛片与其各组分以及大剂量君药雄黄对大鼠肝脏主要药物代谢酶的影响。
, 百拇医药
1 材料
1.1 药品与试剂
复方黄黛片(每片含水飞雄黄39.2 mg，青黛90.4 mg，丹参108.0 mg，太子参32.4 mg，硬脂酸镁2.7 mg)由安徽省天康药业有限公司生产，生产批号150402；水飞雄黄购于北京华邈中药工程技术开发中心，由军事医学科学院放射与辐射医学研究所马百平研究员鉴定；青黛、丹参、太子参均购自北京同仁堂药业股份有限公司；CYP同工酶CYP1A2，CYP2B6，CYP3A4，CYP2C9的特异性底物以及相應代谢产物的标准物质非那西丁/对乙酰氨基酚(phenacetin/acetaminophen)、安非他酮/羟基安非他酮(bupropion/hydroxybupropion)、咪达唑仑/1′-羟基咪达唑仑(midazolam/1′-hydroxymidazolam)、甲苯磺丁脲/4-羟基甲苯磺丁脲(tolbutamide/4-hydroxytolbutamide)来源于USP标准物质或Sigma公司；NAPDH购于Roche公司；盐酸普萘洛尔标准物质购于中国食品药品检定研究院；甲醇和乙腈均为色谱级，购于Fisher公司；Ultra RNA提取试剂盒和BCA蛋白定量试剂盒均购于CWBIO公司；逆转录、聚合酶链式反应试剂盒为TransScript公司产品；其他试剂均为国产分析纯。, http://www.100md.com(徐焕华 汪美汐 谭洪玲 王宇光 汤响林 肖成荣 李桦 高月 马增春)
[关键词]复方黄黛片； 雄黄； 细胞色素P450； 肝微粒体； 酶活性
[Abstract]To investigate the effect of clinical dose of Realgar-Indigo Naturais formula (RIF) and large-dose of Realgar on main drug-metabolizing enzymes CYP450s of rat liver， as well as its regulatory effect on mRNA expression. Wistar rats were administrated orally with tested drugs for 14 days. A Cocktail method combined with HPLC-MS/MS was used in the determination of 4 cytochrome P450 isozymes (CYP1A2， CYP2B， CYP3A and CYP2C) in liver of the rats， and the mRNA expression levels of the above subtypes were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. The results showed that RIF can significantly induce CYP1A2 and CYP2B enzyme activity， and inhibit CYP3A enzyme activity. This result was consistent with the mRNA expression. However， its single compound showed weaker or even contrary phenomenon. Different doses of Realgar also showed significant inconsistencies on CYP450 enzymes activity and mRNA expression. These phenomena may be relevant with RIF compatibility synergies or toxicity reduction. The results can also prompt drug interactions when RIF is combined with other medicines in application.
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[Key words]Realgar-Indigo Naturalis formula； realgar； cytochrome P450； liver microsome； enzyme activity
细胞色素P450(cytochrome P450， CYP450)氧化酶系统是参与机体绝大多数药物、外源性物质和内源性物质进行Ⅰ相氧化代谢的主要酶类[1-2]，临床使用的药物有90%以上由其代谢[3]。因此，该酶在药物代谢以及药物相互作用的研究中有着重要地位。近年来，由于中药应用推广呈现良好态势，而药源性损害事件也屡有报道[4]，因此，基于P450酶系统的中药与其活性成分以及组分配伍的安全性和疗效研究具有十分重要的意义 [5-7]。对确有疗效的有毒中药的相关研究更为重要。
含砷制剂(雄黄、砒霜)在临床治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia， APL)时表现出较好的疗效[8-9]，复方黄黛片(RIF)就是含砷制剂的主要代表药物。其由国医大师黄世林发明，由雄黄、青黛、丹参和太子参组成，临床主治为清热解毒，益气生血，用于初治的APL，疗效显著。复方黄黛片中君药雄黄作为确有疗效的有毒中药，尤为受到关注。目前对复方黄黛片的研究大多聚焦于临床及药理作用的分子机制，因此，本实验针对CYP450酶系统，通过观察给药后大鼠体重、血液指标、CYP各亚酶酶活性水平及mRNA转录水平等的变化，初步探究临床用量的复方黄黛片与其各组分以及大剂量君药雄黄对大鼠肝脏主要药物代谢酶的影响。
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1 材料
1.1 药品与试剂
复方黄黛片(每片含水飞雄黄39.2 mg，青黛90.4 mg，丹参108.0 mg，太子参32.4 mg，硬脂酸镁2.7 mg)由安徽省天康药业有限公司生产，生产批号150402；水飞雄黄购于北京华邈中药工程技术开发中心，由军事医学科学院放射与辐射医学研究所马百平研究员鉴定；青黛、丹参、太子参均购自北京同仁堂药业股份有限公司；CYP同工酶CYP1A2，CYP2B6，CYP3A4，CYP2C9的特异性底物以及相應代谢产物的标准物质非那西丁/对乙酰氨基酚(phenacetin/acetaminophen)、安非他酮/羟基安非他酮(bupropion/hydroxybupropion)、咪达唑仑/1′-羟基咪达唑仑(midazolam/1′-hydroxymidazolam)、甲苯磺丁脲/4-羟基甲苯磺丁脲(tolbutamide/4-hydroxytolbutamide)来源于USP标准物质或Sigma公司；NAPDH购于Roche公司；盐酸普萘洛尔标准物质购于中国食品药品检定研究院；甲醇和乙腈均为色谱级，购于Fisher公司；Ultra RNA提取试剂盒和BCA蛋白定量试剂盒均购于CWBIO公司；逆转录、聚合酶链式反应试剂盒为TransScript公司产品；其他试剂均为国产分析纯。, http://www.100md.com(徐焕华 汪美汐 谭洪玲 王宇光 汤响林 肖成荣 李桦 高月 马增春)