穿心莲转录因子ApNAC1的克隆、亚细胞定位及原核表达(2)
本研究首先对ApNAC1基因进行了生物信息学分析,并对其亚细胞定位、表达模式进行研究。最后ApNAC1在大肠杆菌进行异源表达,并被成功纯化。以上工作为后续进一步研究ApNAC1的体内功能奠定了基础。1 材料
穿心莲采自福建漳州,中国中医科学院中药资源中心郝近大研究员鉴定为穿心莲A. paniculata。所有的大肠杆菌菌株均购自全式金生物科技公司。SYBR Green PCR Master Mix购自大连宝生物技术有限公司,KOD聚合酶购自日本TOYOBO公司,RNA提取试剂、反转录试剂盒购自美国Invitrogen公司,琼脂糖胶回收试剂盒购自Thermo Fisher公司,质粒提取试剂盒购自Omega公司,pEASY-Blunt Zero Cloning Kit,pEASY-Uni Seamless Cloning and Assembly Kit,DNA marker购自全式金生物科技公司,其他试剂为国产分析纯。引物合成和测序由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。
2 方法
2.1 穿心莲叶片RNA 提取
取100 mg穿心莲叶片,液氮速冻后研磨成粉 ......
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