3 结果与分析

    3.1 穿心莲ApNAC1基因的克隆及序列分析

    根据转录组测序结果，设计特异引物，以穿心莲叶片的cDNA做为模板，扩增该基因从起始密码子到终止密码子的完整编码区，得到1条大约1 000 碱基对的特异条带。切胶回收该片段，连接pEASY-Blunt Zero载体，鉴定出阳性克隆后，送往公司测序。测序结果表明载体中插入了目的片段(图1)。序列分析表明该片段包含972个碱基对，编码1个包含323个氨基酸的多肽，相对分子质量为35.9 kDa，预测等电点为6.14。利用NCBI网站的Smart Blast软件进行同源比对，发现该蛋白与模式植物拟南芥NAC家族RD26和大豆NAC4的同源性分别为70%和59%，而在所有物种中与之同源性最高的是芝麻中的NAC蛋白，同源性高达72%。该多肽的N端包含了高度保守的NAM结构域。因此，该基因被命名为ApNAC1， GenBank注册号为KY196416。将ApNAC1与Genbank中17个物种的23种蛋白的氨基酸序列对比，利用MEGA 7.0，使用NJ(boot-strap 1000)构建系统进化树 ......