穿心莲转录因子ApNAC1的克隆、亚细胞定位及原核表达(4)
用基因枪瞬时转化洋葱表皮细胞是研究蛋白亚细胞定位的常用方法，但是它也存在需要特定设备、价格昂贵、操作较为繁琐等缺点。本研究借鉴拟南芥的原生质体转化技术，用穿心莲叶肉细胞的原生质体进行瞬时表达研究，不仅比基因枪法方便快捷，而且能够更加真实地反映ApNAC1蛋白的亚细胞定位。穿心莲叶肉细胞原生质体瞬时转化技术不仅能用于研究穿心莲蛋白的亚细胞定位，还可以通过共转化报告基因的方法用于鉴定转录因子的生物学功能。由于穿心莲尚未建立稳定的遗传转化体系，所以这项技术对鉴定转录因子的功能显得尤为重要。电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay， EMSA)是检测转录因子与体内特定基因启动子结合的重要手段。获得可溶的转录因子蛋白质是进行EMSA实验的关键步骤。本文通过原核表达获得了高纯度的重组蛋白。在后续的实验中我们将利用纯化的ApNAC1蛋白 ......
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