菊苣提取物对高尿酸血症大鼠肾脏果糖转运体9表达的影响(1)
[摘要]该研究给予雄性SD大鼠10%果糖饮水建立高尿酸血症模型，将其分为正常组、模型组、苯溴马隆组(20 mg·kg-1·d-1)、菊苣提取物高、中、低剂量组(5，7.5，10 g·kg-1·d-1)，连续42 d。分别测定血尿酸、血肌酐、尿素氮、尿尿酸，计算肾脏尿酸清除率；免疫组化法、逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分别检测果糖转运体9(glucose transporter family member 9，Glut9)在大鼠肾脏的蛋白及基因的表达水平。探讨中药菊苣提取物降尿酸作用及对肾脏Glut9表达的影响。结果显示菊苣提取物能降低高尿酸血症大鼠血尿酸水平，增加肾脏尿酸清除率，降低肾脏Glut9的蛋白表达，抑制肾脏尿酸重吸收，从而促进肾脏尿酸排泄。
[关键词] 菊苣； 高尿酸血症； 果糖； 肾脏转运蛋白； Glut9
[Abstract] Sixty SD male rats were randomly divided into normal group， model group， benzbromarone group(20 mg·kg-1·d-1)， chicory extract high dose， middle dose and low dose groups (5， 7.5， 10 g·kg-1·d-1). The rats in normal group were given with water， and the rats in other groups were given with 10% fructose solution to establish hyperuricemia models. All the rats were sacrificed on the 42th day. Then their serum uric acid(SUA)， serum creatinine(CRE)， urea nitrogen(BUN) and urinary uric acid(UUA) levels were detected to calculate the clearance rate of uric acid in kidney(CUA). Meanwhile， the protein and gene expression levels of renal glucose transporter family member 9(Glut9) were detected by immunohistochemical and Real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-qPCR) methods. The effects of Chinese herb chicory extract on expression of renal Glut9 and decreasing uric acid were explored in this study， and the results showed that chicory extract could reduce SUA level in rats with hyperuricemia， increase renal CUA， decrease the protein expression of renal Glut9， inhibit uric acid re-absorption in kidney， and thus promote renal uric acid excretion.
, http://www.100md.com
[Key words] chicory； hyperuricemia； fructose； renal transporter； Glut9
中药菊苣为菊科植物毛菊苣或菊苣的干燥地上部分或根，可清肝利胆，健胃消食，利尿消肿[1]。高尿酸血症是血尿酸水平在体内持续性升高或血尿酸盐过饱和的一种病理状态，高尿酸血症不仅是痛风发生的主要病因，还是糖尿病、高血压、心血管疾病及代谢综合征的独立危险因素[2-3]。本课题组长期从事菊苣防治高尿酸血症的研究，发现菊苣可稳定降低血尿酸水平，并从尿酸生成途径对其药效机制进行了探讨[4-5]。尿酸生成过多与排泄障碍均会升高血尿酸水平，机体内66%尿酸由肾脏排泄，33%尿酸由肠道排泄。研究显示90%的高尿酸血症是由于肾脏对尿酸的重吸收增加和(或)分泌减少所致[6]，肾脏中存在多种与尿酸相关的转运体，如果糖转运体Glut9(glucose transporter family member 9)，有机阴离子转运体OAT1，OAT3(organic anion transporter 1，organic anion transporter 3)等，这些转运体通过影响肾小管对尿酸的重吸收或排泄从而改变肾脏的尿酸排泄。其中果糖转运体Glut9由SLC2A9编码，其基因多态性与尿酸生成及尿酸盐肾脏重吸收密切相关，全基因组学关联研究亦指出其与血尿酸水平变化相关[7]。本研究从尿酸的肾脏排泄角度，切入肾脏转运蛋白Glut9，探讨中药菊苣降尿酸的药效机制。
, 百拇医药
1 材料
1.1 动物 雄性SD大鼠60只，体重(240±10) g，购于斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，动物合格证号SCXK(京)2011-0004。
1.2 药物及试剂 菊苣根购于新疆市场，由北京中医药大学中药学院黄建梅教授鉴定为菊苣Cichorii Herba。本课题组提取分离得菊苣地下部分水提取物(以下简称菊苣提取物)：菊苣药材粉碎浸泡，10倍水回流提取1 h后收集滤液，再8倍水回流提取1 h，合并滤液后浓缩。苯溴马隆片(德国赫曼大药厂，批号1208106)；D-果糖(美国AMRESCO公司，批号3573C350)；尿酸(serum uric acid，SUA)试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号151221)；肌酐(creatinine，CRE)、尿素氮(ureanitrogen，BUN)檢测试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所，批号20151218，20151230；Trizol(美国Ambion公司，批号94302)；氯仿、异丙醇等分析纯试剂均购于北京化工厂；6×RNA loading buffe，Glodview核酸染料，均购于博迈德生物科技有限公司，批号705685BB，705972BE；水合氯醛、琼脂糖(北京拜尔迪有限公司)；Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，美国赛默飞公司，批号00270373；Universal SYBR Green Supermix(美国Bio-Rad公司，批号730003407)；Anti-GLUT9 polyclonal antibody(美国Millipore公司，批号Q2361577)；兔超敏二步免疫组化试剂PV-9001，DAB显色试剂盒，抗体稀释液，均购于北京中杉金桥生物技术有限公司，批号K156617G，K165214C，16175A01。, http://www.100md.com(王雨 林志健 聂安政 李丽玉 张冰)
[关键词] 菊苣； 高尿酸血症； 果糖； 肾脏转运蛋白； Glut9
[Abstract] Sixty SD male rats were randomly divided into normal group， model group， benzbromarone group(20 mg·kg-1·d-1)， chicory extract high dose， middle dose and low dose groups (5， 7.5， 10 g·kg-1·d-1). The rats in normal group were given with water， and the rats in other groups were given with 10% fructose solution to establish hyperuricemia models. All the rats were sacrificed on the 42th day. Then their serum uric acid(SUA)， serum creatinine(CRE)， urea nitrogen(BUN) and urinary uric acid(UUA) levels were detected to calculate the clearance rate of uric acid in kidney(CUA). Meanwhile， the protein and gene expression levels of renal glucose transporter family member 9(Glut9) were detected by immunohistochemical and Real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-qPCR) methods. The effects of Chinese herb chicory extract on expression of renal Glut9 and decreasing uric acid were explored in this study， and the results showed that chicory extract could reduce SUA level in rats with hyperuricemia， increase renal CUA， decrease the protein expression of renal Glut9， inhibit uric acid re-absorption in kidney， and thus promote renal uric acid excretion.
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[Key words] chicory； hyperuricemia； fructose； renal transporter； Glut9
中药菊苣为菊科植物毛菊苣或菊苣的干燥地上部分或根，可清肝利胆，健胃消食，利尿消肿[1]。高尿酸血症是血尿酸水平在体内持续性升高或血尿酸盐过饱和的一种病理状态，高尿酸血症不仅是痛风发生的主要病因，还是糖尿病、高血压、心血管疾病及代谢综合征的独立危险因素[2-3]。本课题组长期从事菊苣防治高尿酸血症的研究，发现菊苣可稳定降低血尿酸水平，并从尿酸生成途径对其药效机制进行了探讨[4-5]。尿酸生成过多与排泄障碍均会升高血尿酸水平，机体内66%尿酸由肾脏排泄，33%尿酸由肠道排泄。研究显示90%的高尿酸血症是由于肾脏对尿酸的重吸收增加和(或)分泌减少所致[6]，肾脏中存在多种与尿酸相关的转运体，如果糖转运体Glut9(glucose transporter family member 9)，有机阴离子转运体OAT1，OAT3(organic anion transporter 1，organic anion transporter 3)等，这些转运体通过影响肾小管对尿酸的重吸收或排泄从而改变肾脏的尿酸排泄。其中果糖转运体Glut9由SLC2A9编码，其基因多态性与尿酸生成及尿酸盐肾脏重吸收密切相关，全基因组学关联研究亦指出其与血尿酸水平变化相关[7]。本研究从尿酸的肾脏排泄角度，切入肾脏转运蛋白Glut9，探讨中药菊苣降尿酸的药效机制。
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1.1 动物 雄性SD大鼠60只，体重(240±10) g，购于斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，动物合格证号SCXK(京)2011-0004。
1.2 药物及试剂 菊苣根购于新疆市场，由北京中医药大学中药学院黄建梅教授鉴定为菊苣Cichorii Herba。本课题组提取分离得菊苣地下部分水提取物(以下简称菊苣提取物)：菊苣药材粉碎浸泡，10倍水回流提取1 h后收集滤液，再8倍水回流提取1 h，合并滤液后浓缩。苯溴马隆片(德国赫曼大药厂，批号1208106)；D-果糖(美国AMRESCO公司，批号3573C350)；尿酸(serum uric acid，SUA)试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号151221)；肌酐(creatinine，CRE)、尿素氮(ureanitrogen，BUN)檢测试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所，批号20151218，20151230；Trizol(美国Ambion公司，批号94302)；氯仿、异丙醇等分析纯试剂均购于北京化工厂；6×RNA loading buffe，Glodview核酸染料，均购于博迈德生物科技有限公司，批号705685BB，705972BE；水合氯醛、琼脂糖(北京拜尔迪有限公司)；Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，美国赛默飞公司，批号00270373；Universal SYBR Green Supermix(美国Bio-Rad公司，批号730003407)；Anti-GLUT9 polyclonal antibody(美国Millipore公司，批号Q2361577)；兔超敏二步免疫组化试剂PV-9001，DAB显色试剂盒，抗体稀释液，均购于北京中杉金桥生物技术有限公司，批号K156617G，K165214C，16175A01。, http://www.100md.com(王雨 林志健 聂安政 李丽玉 张冰)