12地黄miRNAs的鉴定根据miRNAs产生的特点，miRNAs的鉴定首先是通过对细胞sRNA直接克隆并测序而获得的。之后，利用生物信息学方法(包括比较基因组预测、同源搜索、利用前体物序列的二级结构特征分析等)预测了许多物种基因组、转录组或EST序列数据库中存在的miRNAs[1214]。近年来，利用高通量测序技术已从65种植物中鉴定了7 827个miRNAs家族(miRBase 210 数据库)。2011年，Yang等[7，9]利用高通量测序技术构建了头茬和重茬地黄sRNAs文库，利用生物信息学技术首次从地黄中鉴定了25个保守的miRNAs家族。根据miRNAs前体物二级结构特征，以NCBI数据库中仅有的1 536条地黄EST序列作为参考序列，利用RNAfold软件和RTPCR方法，从地黄中克隆并鉴定了6个新型miRNAs (属于6个miRNAs家族)。miRNAs在生物体内广泛存在，其数量约为编码基因总量的1%[15]。前期研究以EST数据库为参考所鉴定的地黄miRNAs种类和数量非常有限，为进一步发掘地黄体内的miRNAs ......