冬虫夏草PCR快速检测试剂盒的研制与效果评价(2)
11样品本文所用样品均经成都中医药大学国锦琳教授鉴定,凭证样品保存于成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室,样本信息见表1。
12试剂盒的组成
冬虫夏草PCR快速鉴定试剂盒规格为50次/盒,试剂组成见表2,其中Primer premix为1对冬虫夏草特异引物(SIF6: 5′TTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATT3′,SIR6:5′GCTTGCTTCTTGACTGAGAGGTGCC3′),根据其rDNA ITS序列的特异性位点设计而来,扩增片段大小为174 bp。以冬虫夏草基因组DNA为阳性对照,无菌ddH2O为阴性对照。
13试剂盒的使用
试剂盒使用方法如下:①改良碱裂解法快速提取虫草基因组DNA。在约10 mg虫草子座粉末中加入80 μL Buffer A,混匀,再加入160 μL Buffer B混匀后,静置5 min,取上清液即得虫草基因组DNA。②PCR扩增:扩增体系为25 μL /PCR,包含125 μL 2×Taq PCR master mix,2 μL Primer premix,待检样品或阳、阴性对照品 1 μL,补充ddH2O至25 μL;扩增程序为94 ℃预变性1 min ......
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