不同补肾阴方药对慢性哮喘气道重构的调节作用及其作用机制研究(3)

http://www.100md.com 2017年4月15日 《中国中药杂志》2017年第8期

     2.4 Western blot检测 参考文献方法[7]，采用 Western blot法测定小鼠肺组织气道重构相关蛋白MMP-9，TGF-β1及Smad2，Smad3，Smad7的蛋白含量。末次给药后24 h，每组剩余小鼠取左侧肺叶，剪碎，加入RIPA 裂解液(含50 mmol·L-1Tris-HCl，150 mmol·L-1NaCl，1%NP-40，0.1%十二烷基硫酸钠)，冰上溶胀10 min，4 ℃下15 000 r·min-1离心15 min。上清液上10%SDS-PAGE凝胶电泳，转至硝酸纤维素膜，PBST(磷酸盐缓冲液含0.1%吐温20)洗膜，脱脂奶粉封闭(5%脱脂乳-磷酸盐缓冲液溶液)1 h，PBST洗膜后分别加入抗小鼠MMP-9(1∶1 000)，TGF-β1(1∶1 000)，Smad2(1∶1 000)，Smad3(1∶2 000)，Smad7(1∶1 000)抗体孵育1 h。再次PBST洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(1∶1 000)孵育1 h ......