淹水胁迫对杭菊花色苷及合成相关酶和基因的影响(2)

http://www.100md.com 2017年5月15日 《中国中药杂志》2017年第10期

     2.1 RNA提取与cDNA合成 利用Trizol法提取总RNA。提取后用琼脂糖胶电泳检测RNA的质量，并使用核酸检测仪检测所提RNA的浓度和纯度。取10 μL RNA作为模板，按照反转录试剂盒说明书进行反轉录得到cDNA第一链。

    2.2 引物特异性检测 根据杭菊CHS，DFR基因设计荧光定量PCR引物CHSq-F：5′-TCGTTGGTCAAGCTTTGTTC-3′和CHSq-R：5′-CTCCCTCCGAGTCTGGTAAG-3′；DFRq-F：5′-GACATTATGGAAGGCGGATT-3′和DFRq-R：5′-GTGGCAACATGAAACACTC-3′；内参基因引物为actin-F：5′-ACAACTGCTGAACGGGAAAT-3′和actin-R：5′-TCATAGACGGCTGGAAAAGG-3′。反应体系如下：cDNA 2 μL；10×Taq buffer 2 μL；ExTaq 0.2 μL；Mg2+ (25 mmol·L^-1) 2 μL；dNTP(2.5 mmol·L^-1)2 μL；引物 ......