5种石斛对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用(3)

http://www.100md.com 2017年5月15日 《中国中药杂志》2017年第10期

     2.5 荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中相关炎症因子的表达 按照试剂盒说明提取小鼠肝脏组织中总RNA，逆转录合成cDNA，以β-actin作为内参基因，进行荧光定量PCR。PCR引物由上海生工生物公司设计合成，TNF-α的上游引物为5′-CTTCCAGAACTCCAGGCGGT-3′，下游引物为5′-CACTTGGTGGTTTGCTACGACG-3′；IL-1β的上游引物为5′-CTCGTGCTGTCGGACCCAT-3′，下游引物为5′-CAGGCTTGTGCTCTGCTTGTGA-3′；IL-6的上游引物为5′-TTCCATCCAGTTGCCTTCTT-3′，下游引物为5′-CAGAATTGCCATTGCACAAC-3′；β-actin的上游引物为5′-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC-3′，下游引物为5′-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3′。实时荧光定量PCR条件为： 95 ℃预变性300 s；95 ℃变性15 s，61 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，重复40个循环。实验重复3次，mRNA的表达水平采用比较阈值法进行分析 ......