中药穿山甲的DNA分子鉴定研究(1)

http://www.100md.com 2017年6月1日 《中国中药杂志》2017年第11期

     [摘要] 对中药穿山甲及其混伪品进行分子鉴定研究，建立一个稳定、准确的位点特异性PCR鉴别体系。收集整理穿山甲属动物组织样本及NCBI序列，提取基因组总DNA，PCR扩增Cytb和COⅠ序列并测序，通过BioEdit软件进行序列比对，应用MEGA 6.0构建序列系统聚类树，并根据序列特异位点设计和筛选中华穿山甲特异性鉴别引物，并对PCR反应条件进行退火温度、DNA模板上样量和PCR循环数等条件的适应性考查。结果表明：Cytb和COⅠ序列均能有效对穿山甲正、伪品进行聚类分析；在位点特异性PCR反应体系中，当退火温度为55～60 ℃，DNA模板量3～100 ng，PCR扩增35个循环时，基于COⅠ序列的引物COⅠ-S10/A5 能使中華穿山甲扩增出约400 bp的特异性条带，而其他穿山甲品种扩增结果为阴性。该文基于COⅠ序列的引物COⅠ-S10/A5能实现中华穿山甲与伪品印度穿山甲、马来穿山甲、树穿山甲等的准确、稳定鉴别 ......