冬凌草甲素诱导三阴乳腺癌MDA—MB—231细胞凋亡及对细胞内活性氧水平的影响(2)

http://www.100md.com 2017年6月15日 《中国中药杂志》2017年第12期

     1.3 细胞存活率测定 96孔细胞培养板中每孔接种6×10³个MDA-MB-231细胞，细胞贴壁后更换新的培养液，加入不同浓度(10，20，30，40，50 μmol·L^-1)冬凌草甲素处理细胞，同时设不加药物的对照组(加入等体积的培养液及溶剂DMSO)和空白对照组，每组3个重复。药物处理48 h后每孔加入15 μL MTT液继续培养4 h，弃上清，每孔加入150 μL DMSO，结晶充分溶解后用酶标仪测定570 nm处吸光度A。

    细胞存活率=(A实验组-A空白组)/(A对照组-A空白组)×100%

    1.4 Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞早期凋亡 6孔细胞培养板中每孔接种3×10⁵个细胞，细胞贴壁后换液加入含20，30，40 μmol·L^-1冬凌草甲素的新培养液，设置不加药物的对照组，每個处理3个重复。药物作用24 h后收集细胞，调整细胞密度为5×10⁵～1×10⁶个/mL ......