人参皂苷生物合成基因组织表达特性的研究(2)
1 材料1.1 人参组培苗 取人参种子,用70%乙醇水溶液浸泡3 min,然后用1%次氯酸钠浸泡30 min,灭菌去离子水洗3遍,将已成熟的胚状体从种子中转移出来,并在含有1%蔗糖的1/2 MS固体培养基中(25±2) ℃培养3周(16 h光照/8 h黑暗),萌发后的材料转移到分化培养基(MS+3 mg·L-1 6-BA+5 mg·L-1 NAA +1 mg·L-1 IAA)中诱导成苗,可作为后续的实验材料使用。
1.2 人参不定根 组培苗的叶柄切成1.0 cm长,作为诱导人参不定根的外植体。将外植体在1/2 MS(含3.0 mg·L-1 IBA)固体培养基中(25±2) ℃暗培养4周,待外植体形成不定根后将其分离,并继代到1/2 MS液体培养基(含3.0 mg·L-1 IBA)中(25±2) ℃暗培养。3周继代1次,12周后,不定根生长稳定快速,可作为后续的实验材料使用。
1.3 试剂 TRIzol Plant RNA Kit (Life technologies) 购于北京江晨源远生物科技有限责任公司;M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit ......
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