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编号:13080693
水蛭通过p38MAPK信号通路对早期动脉粥样硬化大鼠VSMCs的影响(3)
http://www.100md.com 2017年10月8日 《中国中药杂志》 2017年第16期
     23主动脉病理学观察取血后,分离出主动脉弓并剪取05 cm,生理盐水洗净血迹后放入10%中性福爾马林溶液固定,以备制作石蜡切片(4~5 μm)。每组随机选取7个大鼠主动脉弓标本,每一标本取一张石蜡切片进行苏木精和伊红(HE)染色,200倍光镜下观察主动脉的形态。

    24免疫组织化学法检测PCNA,Caspase3的表达选取已制作好的石蜡切片(每组各7个标本),每一标本PCNA,Caspase3指标各染2张片;按SABC免疫组化试剂盒说明书进行操作,大鼠PCNA,Caspase3对应抗体分别按1∶100及1∶150稀释作为一抗,显二管DAB显色,封片。免疫组化完成后,将各指标染色切片于400倍光镜下观察5个不重叠视野并拍照。使用ImagePro Plus 60软件测量分析VSMCs分布区域面积(area)和其所在范围内PCNA,Caspase3阳性染色积分光吸收度(A),最后用每个标本的平均光密度值(A/area)进行半定量分析。

    25Western blot检测MKK3,p38,Cmyc蛋白的表达剪取剩余胸主动脉,分段放入冻存管于液氮中迅速冷冻,后转入-80 ℃冰箱保存待检测。各组随机取7个冷冻标本,复温后用预生理盐水漂洗去除血迹,超声破碎,取裂解液,加入上样缓冲液,混匀,取离心后的样本上样,按照电泳程序进行电泳。电泳结束后,转膜。转膜结束后,取下膜,浸没在5%牛奶中封闭1 h,之后按照说明书使用要求加一抗,于4 ℃孵育过夜 ......
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