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编号:13081279
葫芦二烯醇的异源高效合成研究(3)
http://www.100md.com 2017年10月8日 《中国中药杂志》 2017年第17期
     2.5 葫芦二烯醇检测分析 溶剂(甲醇丙酮1∶1)配制麦角固醇、鲨烯和葫芦二烯醇标准品溶液,使用GCMS进行样品的定性和定量分析[7,10]。GCMS测定条件:进样口温度300 ℃,进样体积1 μL,不分流,溶剂延时12 min;色谱柱:HP5ms(0.25 mm×30 m);色谱条件:80 ℃,保持1 min;20 ℃·min-1升温至300 ℃,保持 15 min;MS条件:SIM:69,218,363,411。

    3 结果与分析

    3.1 葫芦二烯醇生物合成途径的异源重建 酿酒酵母自身存在合成2,3环氧鲨烯的生物途径,引入外源葫芦二烯醇合酶(CBS)基因即可重建葫芦二烯醇生物合成途径。MVA途径中的相关酶[14]、法呢基焦磷酸合成酶(FPS)[1517]、鲨烯合酶(SQS)[1819]和环氧鲨烯单加氧酶(SE)[2021]是三萜化合物合成过程中的关键酶,过表达这些酶可以提高酿酒酵母三萜化合物的合成能力。实验室前期中,已经获得FPS ......
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