内皮细胞提取和UHPLCLTQOrbitrap法分析筛选苦碟子注射液中的活性成分(1)
[摘要] 应用细胞生物色谱法及UHPLCLTQOrbitrap质谱联用技术快速筛选鉴定苦碟子注射液中可能的活性成分。选择人脐静脉内皮细胞(huma umbilical vein endothelid cells，HUVEC)作为靶细胞，先使苦碟子注射液中的活性成分与靶细胞特异性结合，经细胞靶点脱敏失活后，应用LCMS快速鉴定与细胞靶向亲和的化学成分，从而筛选得到苦碟子注射液中可能的活性成分。根据获得的精确相对分子质量数据、保留时间以及结合苦碟子注射液中的化学成分进行鉴定归属。最终，从细胞裂解液中共筛选鉴定出9个化学成分，其中包括倍半萜内酯类成分4个、有机酸类成分3个以及黄酮类成分2个。应用细胞生物色谱法与UHPLCLTQOrbitrap质谱联用技术快速筛选鉴定苦碟子注射液中可能的活性成分，可为苦碟子注射液药效物质基础研究提供一种快捷、有效的方法学借鉴。
[关键词] 苦碟子注射液； 人脐静脉内皮细胞； 细胞生物色谱法； 液质联用技术
HUVECs extraction and UHPLC LTQ Orbitrap analysis for screening
, 百拇医药
vascular endothelium protective components in Kudiezi injection
LIU Siyi1，2， ZHANG Hongzhu3， FAN Jing4， SHANG Zhanpeng1， WANG Fei1，LI Weijie1， LIU Ying1， LU Jianqiu1*， ZHANG Jiayu1*
(1. Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China；
2. Center for Drug Evaluation， China Food and Drug Administration， Beijing 100038， China；
3. The First Hospital of Fangshan District， Beijing 102400， China； 4. WuXi AppTec， Shanghai 200131， China)
, 百拇医药
[Abstract] An effective method has been employed as a tool for screening active components in Kudiezi injection by using cell chromatography and sensitive UHPLCHRMSn method. The potential bioactive components in Kudiezi injection could be selectively bound to the HUVECs target cells first. After cell target desensitization and inactivation， the chemical constituents with cell target affinity were identified by LCMS， so as to screen the possible active components in Kudiezi injection. Based on the accurate mass measurements and the retention time， in total， 9 compounds were tentatively identified and characterized， including 4 sesquiterpene lactones， 3 phenolic acids and 2 flavonoids. HUVECs biospecific extraction coupled with UHPLCLTQOrbitrap analysis could provide a rapid and efficient method for the identification of potential bioactive components in Kudiezi injection， and provide the reference for further research on its effective materials basis.
, http://www.100md.com
[Key words] Kudiezi injection； HUVECs； cell chromatography； UHPLC LTQ orbitrap
苦碟子为菊科苦荬菜属植物抱茎苦荬菜Ixerissonchifolia (Bunge) Hance的全草，具有清热解毒、排毒止痛等功效[1]。苦碟子注射液为抱茎苦荬菜提取精制而成的静脉注射液，具有抗血小板凝聚、降血脂、改善微循环、抗肿瘤等作用，主要用于治疗心绞痛、脑梗死、冠心病等病症，临床上已广泛应用于心脑血管疾病[23]。然而，苦碟子注射液药效物质基础仍有待进一步研究[46]。随着中药现代化进程的发展，明确中药中的药效活性物质，成为系统研究和梳理的重点[7]。
现代药理研究发现，药物可与细胞膜上的受体、通道、酶等特异性结合或进入细胞内部是药物发挥作用的一个重要原因[89]。细胞生物色谱法便是基于此理论发展而来的一种新兴生物色谱技术。其通过药物可与靶点结合的原理，将效应物质进行靶向富集分离，进而应用于中药药效物质基础的筛选鉴定和作用机理研究[1011]。基于此，本文应用细胞生物色谱法联合液质联用技术对临床常用中藥苦碟子注射液中可能的活性成分进行筛选鉴定：先使苦碟子注射液与人脐静脉内皮细胞(huma umbilical vein endothelid cells，HUVEC)进行特异性结合，通过缓冲液洗掉未被细胞特异性结合的成分，而后使细胞靶点失活并将被结合的化学成分从细胞中释放，应用UHPLCLTQOrbitrap技术将该解离液按色谱条件进行色谱分析，以期对苦碟子注射液中可能的活性成分进行快速筛选鉴定，以及为药效成分不明确中药的药效物质研究提供快捷有效的方法。, http://www.100md.com(刘思燚 张红柱 范菁 尚展鹏 王菲 李玮婕 刘颖 卢建秋 张加余)
[关键词] 苦碟子注射液； 人脐静脉内皮细胞； 细胞生物色谱法； 液质联用技术
HUVECs extraction and UHPLC LTQ Orbitrap analysis for screening
, 百拇医药
vascular endothelium protective components in Kudiezi injection
LIU Siyi1，2， ZHANG Hongzhu3， FAN Jing4， SHANG Zhanpeng1， WANG Fei1，LI Weijie1， LIU Ying1， LU Jianqiu1*， ZHANG Jiayu1*
(1. Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China；
2. Center for Drug Evaluation， China Food and Drug Administration， Beijing 100038， China；
3. The First Hospital of Fangshan District， Beijing 102400， China； 4. WuXi AppTec， Shanghai 200131， China)
, 百拇医药
[Abstract] An effective method has been employed as a tool for screening active components in Kudiezi injection by using cell chromatography and sensitive UHPLCHRMSn method. The potential bioactive components in Kudiezi injection could be selectively bound to the HUVECs target cells first. After cell target desensitization and inactivation， the chemical constituents with cell target affinity were identified by LCMS， so as to screen the possible active components in Kudiezi injection. Based on the accurate mass measurements and the retention time， in total， 9 compounds were tentatively identified and characterized， including 4 sesquiterpene lactones， 3 phenolic acids and 2 flavonoids. HUVECs biospecific extraction coupled with UHPLCLTQOrbitrap analysis could provide a rapid and efficient method for the identification of potential bioactive components in Kudiezi injection， and provide the reference for further research on its effective materials basis.
, http://www.100md.com
[Key words] Kudiezi injection； HUVECs； cell chromatography； UHPLC LTQ orbitrap
苦碟子为菊科苦荬菜属植物抱茎苦荬菜Ixerissonchifolia (Bunge) Hance的全草，具有清热解毒、排毒止痛等功效[1]。苦碟子注射液为抱茎苦荬菜提取精制而成的静脉注射液，具有抗血小板凝聚、降血脂、改善微循环、抗肿瘤等作用，主要用于治疗心绞痛、脑梗死、冠心病等病症，临床上已广泛应用于心脑血管疾病[23]。然而，苦碟子注射液药效物质基础仍有待进一步研究[46]。随着中药现代化进程的发展，明确中药中的药效活性物质，成为系统研究和梳理的重点[7]。
现代药理研究发现，药物可与细胞膜上的受体、通道、酶等特异性结合或进入细胞内部是药物发挥作用的一个重要原因[89]。细胞生物色谱法便是基于此理论发展而来的一种新兴生物色谱技术。其通过药物可与靶点结合的原理，将效应物质进行靶向富集分离，进而应用于中药药效物质基础的筛选鉴定和作用机理研究[1011]。基于此，本文应用细胞生物色谱法联合液质联用技术对临床常用中藥苦碟子注射液中可能的活性成分进行筛选鉴定：先使苦碟子注射液与人脐静脉内皮细胞(huma umbilical vein endothelid cells，HUVEC)进行特异性结合，通过缓冲液洗掉未被细胞特异性结合的成分，而后使细胞靶点失活并将被结合的化学成分从细胞中释放，应用UHPLCLTQOrbitrap技术将该解离液按色谱条件进行色谱分析，以期对苦碟子注射液中可能的活性成分进行快速筛选鉴定，以及为药效成分不明确中药的药效物质研究提供快捷有效的方法。, http://www.100md.com(刘思燚 张红柱 范菁 尚展鹏 王菲 李玮婕 刘颖 卢建秋 张加余)