吉马酮改善H2O2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用(3)
24RTPCR检测细胞中Bax,Bcl2,Caspase3 mRNA表达实验分组及细胞处理同21与22,再提取RNA:每孔加入RNAiso plus 1 mL,吹打使细胞溶解,吸入15 mL无酶EP管中;再加300 μL氯仿,振荡混匀,12 000 r·min-1 4 ℃低温离心10 min,取上清液;加入等量异丙醇,混匀,-20 ℃静置30 min,12 000 r·min-1 4 ℃低温离心10 min,弃上清液;分别加入750 μL无水乙醇和250 μL DEPC水,12 000 r·min-1 4 ℃低温离心10 min,弃上清液;晾干,约10 min,然后加入20 μL DEPC水,混匀,检测RNA浓度。再把所有组稀释至02 g·L-1。最后分别严格按照试剂盒说明逆转录和扩增等。引物:Bax 上游:GACGAACTGGACAGTAACATGGA,下游:GCAAAGTAGAAAAGGGCGACA,产物长度149 bp,退火温度61 ℃;Bcl2 上游: ACTTCGCCGAGATGTCCAG ......
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