固相亲合载体应用于中药复杂体系直接作用靶点研究的现状与挑战(3)
3 基于固相亲合载体的中药复杂体系靶点研究策略近几年来,随着光化学技术的不断进步,人们发现了一系列具有光敏活性的化学基团,如二苯甲酮和三氟甲基取代氮杂环丙烷这些光敏基团的特点是可在紫外光激发下活化成碳自由基,而碳自由基可以高效的插入到化合物的碳氢键之间,形成共价偶联[26-27]。由于中药活性成分中大多具有碳氢键,所以如果将光敏基团键合到固相载体(如微球、芯片)的表面,进而可以利用光反应活化这些光敏基团,实现将中药活性成分偶联到固相载体表面的设想。基于该策略,可以将中药甚至整个方剂的所有化学成分整体键合到固相载体表面,并用于后续的靶点钩钓与鉴定。
本课题组前期基于该靶点钩钓策略研究并鉴定了多个中药方剂、单味药及其有效部位的作用靶点群。即将中药的全化学成分组或有效部位成分通过光活化偶联技术键合在固相磁性微球的表面,进而将被修饰的磁性微球与细胞或组织裂解液进行共孵育,通过固定在微球表面的中药化学分子与靶点之间的特异性相互作用,将不同的靶点富集到固相微球的表面,再通过特异性洗脱将靶点从微球表面剥离下来,进行高分辨质谱鉴定与分析,从而得到该中药化学成分组对应的靶点群(图1) ......
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