2方法

    21无菌材料的获得

    款冬叶片上表面被蛛丝状毛，下表面及叶柄被白色毡毛，灭菌较为困难，因此在消毒液的各处理中加入2滴聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)[4]以加速消毒剂的浸润效果。本次试验采用2因素3水平完全随机试验设计[5]，设置75%乙醇处理30 s，01%HgCl(60，180，300 s)，漂白粉上清液(600，900，1 200 s)，共12个处理，每处理10瓶培养基，每瓶接1块外植体，重复3次。接种2周后检查污染率与褐变率。

    22培养条件

    培养基中加入3%的蔗糖，生根培养时加2%[6]，琼脂6 g·L-1，pH 58，愈伤诱导阶段pH 56[7]；培养温度为(22±2) ℃，光周期12 h/12 h (光/暗)，生根培养时16 h/8 h (光/暗)；光照强度：愈伤诱导时约20 μmol·m-2·s-1 [8]，其他各阶段为50 μmol·m-2·s-1。

    23愈伤组织培养

    消毒灭菌所得的材料置于铺有无菌滤纸的接种盘中，切去两头褐化部分，将剩余部分切割成05～10 cm的小段[9] ......