丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离(3)
1～4.含2%SDS，2% Tween20，2% Triton X100，2% NP40缓冲液提取融合蛋白结果；M.蛋白质分子量标准；CK.转空质粒毛状根对照。选择3个浓度梯度，即05%，1%，2%的NP40和Triton X100替换原始提取缓冲液中的去污剂，尝试提取效果。NP40的提取效果受浓度的影响很大。用包含05% NP40缓冲液提取的样品中检测不到目的蛋白；NP40浓度增加到1%时，目的蛋白能被检测到，但是条带很弱；而用包含2% NP40的缓冲液能够得到最大量的目的蛋白(图6)。和NP40不同的是，不同浓度的Triton X100提取效果变化不明显，3个浓度都有较好的提取效果，即使05%的浓度也能分离出较多的目的蛋白。分离的目的蛋白主要准备用于下游的免疫亲和纯化以分离相互作用蛋白，而较低的去污剂浓度有利于维持蛋白的空间结构及其与其他蛋白的相互作用。综合上述实验结果，筛选出05% Triton X100作为提取缓冲液的去污剂成分以分离CYP76AH1cFlag蛋白。
1～6.含05%Triton X100，1%Triton X100，2%Triton X100，05%NP40 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4632 字符。