丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离

丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离(1)

http://www.100md.com 2017年10月15日《中国中药杂志》 2017年第20期

丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离,蛋白质复合物,次生代谢物,丹参酮,去污剂

     [摘要]蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成，其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要。该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系，通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根，并以此作为后续提取丹参酮合成途径中蛋白质复合物的组培材料。通过优化蛋白提取缓冲液中的去污剂种类和浓度，筛选出含05% Triton X100的缓冲液为最佳提取缓冲液，并分离得到相对大量的可溶性CYP76AH1蛋白质。该研究为后续进一步分离纯化与CYP76AH1相互作用的蛋白质复合物奠定了基础，也为深度解析丹参酮合成代谢通路提供思路。

    [关键词]蛋白质复合物；次生代谢物；丹参酮； CYP76AH1；转基因毛状根；去污剂

    [Abstract]Protein complexes are involved in the synthesis of multiple secondary metabolites in plants ......

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