骨质疏松肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2，Wnt/βcatenin信号通路的研究(3)
于37 ℃，含5%CO2，饱和湿度的培养箱内培养，3 d后换液去除未贴壁细胞。此后每隔3 d 换液1次，直至细胞约80%融合时按1∶3传代，反复纯化，传至第3代进行实验，成骨细胞碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果见图2。A碱性磷酸酶染色；B茜素红染色。
23骨质疏松、骨质疏松肾阳、肾阴虚证型下左归丸含药血清的制备随机取OP大鼠、OP兼肾阳虚大鼠、OP兼肾阴虚大鼠各20只，随机分为2组，一组灌胃纯水，另一组灌胃左归丸药液。具体方法如下：按照每100 g灌胃15 mL，1 d 2次，连续6次后，于末次给药后1 h，心脏取血。4 ℃静置2 h，于4 ℃，4 000 r·min-1离心25 min，即得，同组血清混合。56 ℃水浴灭活30 min，过膜，储存于-80 ℃冰箱，备用。临用前，将血清用DMEM双抗基础培养基(不含FBS)稀释成各所需浓度。
24不同状态下左归丸含药血清对成骨细胞增殖的影响取生长良好的第3代成骨细胞，以3 000个/孔接种于96孔板中，24 h贴壁后 ......
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